牙周牙髓联合病变细菌的PCR-DGGE分析

发布时间：2020-03-28 18:39

【摘要】：目的牙周炎和牙髓根尖周病的发病因素和病理过程虽不完全相同,但牙周袋内和感染牙髓内都存在以厌氧菌为主的混合感染,它们所引起的炎症和免疫反应有许多相似之处,二者的感染和病变可以相互扩散和影响,导致牙周牙髓联合病变的发生。关于牙周炎和牙髓根尖周病作为独立的病变形态的细菌学研究,数量很多,涉及方面亦很广泛。而介于二者“交叉地带”的牙周牙髓联合病变的细菌学研究要相对的少一些,而且这些研究多以传统的细菌培养为基本手段,对已知细菌进行检测和相关研究,对于未能人工培养的细菌和未知菌的关注很少,而相关研究表明,口腔中不能被培养出来的微生物种类和数量远远高于能够培养的微生物,因此我们可以认为之前以培养为研究手段的研究结果,并不能了解牙髓炎和根尖周炎微生物群体的全貌。现代微生物技术中的变性梯度凝胶技术(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis, DGGE)可比较直观的呈现某种环境中微生物的群落情况与变化,并获取不可培养细菌和未知菌的基因组资源,为进一步深入了解牙周牙髓联合病变的微生物种群全貌提供了新的手段。本文利用变性梯度凝胶电泳技术观察牙周牙髓联合病变患牙牙周组织和根管中原始菌群分布状况及其异同,并通过克隆测序技术来试图探讨两部位可能存在的优势菌,为该病变的进一步研究奠定一定的细菌学基础。方法 1、牙周牙髓联合病变菌群结构的研究从13例牙周牙髓联合病变患牙分别采集患牙根尖1/3处牙周细菌和根管牙髓细菌,提取细菌总DNA,以其为模板扩增16SrRNA基因可变区,再进行变性梯度凝胶电泳,观察菌种条带分布情况。用QuantityOne软件对DGGE图谱进行相似系数(Dice Coefficient)计算和聚类分析。应用SPSS17.0统计软件对实验数据进行统计学分析 2、牙周牙髓联合病变具体菌种的研究对DGGE凝胶中有代表性的条带进行切胶回收,随后克隆测序,通过BLAST序列比对,了解某些条带对应的细菌菌种。结果 1、13例样本的DGGE图谱条带数的配对t检验结果显示牙周、牙髓样本的菌种条带数之间有明显的统计学差异(p0.01)。Spearman等级相关分析显示二者之间无正相关性。同牙的牙周、牙髓菌种条带相似系数(Dice Coefficient)为13.1%-62.5%不等。 2、DGGE凝胶条带回收克隆测序BLAST("g98%序列相似度)的结果显示：牙周牙髓联合病变患牙根尖区1/3处牙周菌种可能有Campylobacter, Fusobacterium, Neisseria, Peptostreptococcus, Veillonella, Aggregatibacter, Enterobacter, Haemophilus等,该处对应根管中菌种可能有Mogibacterium, Corynebacterium, Neisseria, Actinomyces等。约50%测序序列BLAST结果序列相似度95%。结论 1、牙周牙髓联合病变(牙周来源)中牙周组织和邻近根管牙髓组织中菌种总数之间没有正相关性。二者存在共有菌,但不是所有的牙周细菌都会出现在邻近的根管中；根管中的细菌也不是完全来自于邻近的牙周组织,其局部环境中原著的细菌可能在该病变过程中发生再繁殖。 2、牙周牙髓联合病变牙周组织和根管中可能存在目前尚未被认知的优势菌种。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R781.4

【参考文献】