NDRG1对静压力作用下人牙龈成纤维细胞COL-Ⅰ和Smad3表达的影响

发布时间：2020-04-11 11:19

【摘要】：目的:(1)研究静压力对人牙龈成纤维细胞(HGFs)表达NDRG1和Smad3的影响;(2)检测过表达NDRG1对HGFs增殖能力及表达Smad3和COL-Ⅰ的影响,探究NDRG1对静压力作用下牙龈组织改建的作用。方法:1、建立HGFs-PLGA三维培养重力加载模型,RT-qPCR、Western Blot检测25g/cm~2静压力作用于PLGA支架上的HGFs0,12,24,48小时后,HGFs表达NDRG1、Smad3mRNA和蛋白的情况;2、以慢病毒为载体转染HGFs,过表达NDRG1,CCK-8法检测过表达NDRG1对细胞增殖能力的影响,RT-qPCR、Western Blot检测过表达NDRG1后HGFs表达COL-Ⅰ、Smad3mRNA和蛋白的情况。结果:(1)25g/cm~2静压力作用于PLGA支架上的HGFs后,相对于0小时组,不同时间点NDRG1mRNA和蛋白均明显上调,在24小时达到峰值,各组差异具有统计学意义(P0.05)。(2)Smad3mRNA自加力后持续下降,除了24小时和48小时时差异无统计学意义外,其余各组差异具有统计学意义(P0.05);Smad3蛋白自加力起亦持续下降,且各组差异具有统计学意义(P0.05)。(3)慢病毒转染HGFs后第1天,各组细胞的增殖能力无差异;阴性对照组1到5天细胞的增殖能力呈轻微的持续上升,但均低于空白对照组,第7天时急剧下降;转染后第3天起,过表达NDRG1组HGFs的增殖能力较阴性对照组的明显增强,并呈明显的持续增殖趋势,且自第5天起与空白对照组的相同。(4)过表达NDRG1组COL-Ⅰ和Smad3 mRNA和蛋白的表达均低于阴性对照组(P0.05),阴性对照组COL-Ⅰ和Smad3 mRNA和蛋白的表达均高于未转染细胞组(P0.05)。结论:25g/cm~2静压力作用于HGFs后上调NDRG1mRNA和蛋白的表达,下调Smad3mRNA和蛋白的表达;而过表达NDRG1可促进HGFs增殖,抑制Smad3和COL-ⅠmRNA和蛋白的表达。提示在静压力作用于HGFs的过程中,NDRG1可阻断Smad3信号通路,抑制COL-Ⅰ的表达,促进HGFs增殖,对静压力作用下牙龈组织的改建有重要作用。
【图文】：

示意图,示意图,孔板,细胞

5）置于 37℃、5%CO2的恒温培养箱中培养 1 小时，待细胞贴 PLGA架生长后再在每孔中滴加培养基 1ml，，继续培养。6）2 天后观察可见 24 孔板底壁已长满细胞，此时将 PLGA 支架至新的 24 孔板继续培养，避免非支架上的细胞干扰。7）继续培养 4 天后，在 PLGA 支架边缘可见大量细胞游出，此时了便于重力加载，将 PLGA 支架移至新的 6 孔板，每孔 1 片,加.5ml10%FBS。分为对照组（0h）和加力 12h，24h，48h 的实验组，照组不施加压力,实验组施加 25g/cm2静压力（如图 1-1 所示）。组设置三个副孔。

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NDRG1 对静压力作用下人牙龈成纤维细胞 COL-Ⅰ和 Smad3 表达的影响 2015 级硕士学位论文表 1-1 静压力对 HGFs 表达 NDRG1mRNA 的影响（Mean±SD）Table1-1 The mRNA expression of NDRG1 in HGFs under compressive force加力时间（h）样本数（n） NDRG1mRNA 相对表达量0 6 1.04±0.8912 6 4.38±1.0*24 6 6.45±1.12*#48 6 4.58±1.44*注释：“*”表示不同加力时间组与未加力组（0h 组）比较 P＜0.05；“#”表示不同加力时间组间比较 P＜0.05。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R783.5

【参考文献】