腭裂骨膜牵张成骨修复与机理的初步研究

发布时间：2020-05-03 16:26

【摘要】： 目的:在建立骨膜牵张成骨犬实验腭裂模型的基础上,通过自行设计的镍钛记忆合金牵张器对腭裂裂隙缘的骨膜进行牵张,检测不同时期激活素A(activin,ACT A)和卵泡抑素(follistatin,FS)mRNA的表达,探讨ACT A/F S系统对腭裂边缘骨膜牵张成骨修复的调节模式,同时观察不同时期新骨形成的结构特点,研究新骨形成的连续过程及规律,对骨膜牵张成骨修复腭裂的机理进行初步探讨。 材料与方法: 本研究分为两个部分: 1.犬硬腭骨膜牵张成骨术中激活素A和卵泡抑素表达的研究 1.1选用健康杂种幼犬15只,手术建立骨膜牵张成骨的犬实验腭裂模型,并于腭裂模型制作后两个月,于腭裂裂隙缘骨膜下安放镍钛合金骨膜牵张器,以钛钉固定,牵张器即以250±20g牵张力持续牵引骨膜。 1.2在骨膜牵张器放置后10、20、30、40和60天,各处死3只动物,切取牵张侧的新生骨组织及对照侧骨切开处未牵张的骨组织提取RNA,用RT-PCR检测ACTA、FSmRNA各时期的表达。 2.腭裂缘骨膜牵张成骨的新骨形成研究 2.1选用健康杂种幼犬10R,其中8只动物的手术及牵张器的放置方法同第一部分,2只动物不作任何处理。 2.2在骨膜牵张器放置后20、30、40和60天,各处死动物2只,共8只,骨膜牵张器放置一侧为实验组,未放置一侧为对照组。另2只不作任何处理动物为空白对照组,于饲养60天后处死。在处死动物前14天和前3天肌肉注射四环素(50 mg/kg),处死后切取含实验组新骨组织、对照组以及空白对照组骨组织的0.5cm×1cm大小骨块,采用硬组织骨切片技术,进行组织学分析和骨组织计量学动态参数检测,探讨新骨形成规律。 结果:(1)RT-PCR实验结果:对照侧骨切开未牵张的骨组织10至60天标本检测出少量ACT A和FS mRNA,各组间比较无明显统计学意义(p＞0.05)。牵张侧的新骨组织在骨膜牵张器放置后10天已有ACT A和FS mRNA的表达,随着骨膜牵张器放置时间延长,ACT A和FS mRNA的表达量逐渐上升,骨膜牵张器放置后20、30、40及60天ACT A mRNA表达量分别为lO天的1.78、2.82、4.27及3.04倍;骨膜牵张器放置后20、30、40及60天FS mRNA表达量分别为10天的1.52、2.12、2.47及1.90倍。牵张侧ACT A mRNA的表达量10天与20天标本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);10天与30、40及60天标本比较,差异均有统计学意义(p＜0.05);20天与30天标本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);20天与40、60天标本比较,差异均有统计学意义(p＜0.05);30天与40、60天标本比较,差异有统计学意义(p＜0.05);40与60天标本比较,差异有统计学意义(p＜0.05)。牵张侧FSmRNA的表达量10天与20天标本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);10天与30、40及60天标本比较,差异均有统计学意义(p＜0.05);20天与30、40、60天标本比较,差异均无统计学意义(p＞0.05):30天与40、60天标本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);40与60天标本比较,差异无统计学意义(p＞0.05)。ACT A mRNA表达量对照侧与牵张侧10天样本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);对照侧与牵张侧20天样本比较,差异有统计学意义(p＜0.05);对照侧与牵张侧30、40、60天样本比较,差异有非常显著意义(p＜0.01)。FS mRNA的表达量对照侧与牵张侧10、20天样本比较,差异无统计学意义(p＞0.05);对照侧与牵张侧30、40、60天样本比较,差异有统计学意义(p＜0.05);(2)腭裂模型的裂隙缘骨膜受牵张后,最终在骨膜下形成了新骨。组织学观察结果显示了新生骨在成骨细胞数量上的增长,以及胶原纤维和骨小梁排列方向上的变化。大量沿牵张方向排列的胶原纤维组织在增生成骨细胞作用下,钙化沉积为新骨,并逐渐改建成熟;(3)四环素荧光标记结果:在骨膜牵张器放置后不同牵张时期荧光标记带长度及面积上的变化,荧光亮度由弱变强,双标记线由无到有,双标间距由窄变宽,显示了新骨形成过程的一个动态变化规律;(4)骨组织计量学动态参数测量结果:对照组在靠近骨切开处仅见少量散在荧光带分布,未见有明显四环素双标线形成;实验组20、30、40及60天四环素双标平均间距分别为:46.07±0.58μm、77.36±2.5μm、97.18±1.6μm、115.2±2.91μm,各组间比较差异有非常显著意义(p＜0.01);实验组20、30、40及60天平均矿化沉积率分别为:4.18±0.05μm/d、7.03±0.23μm/d、8.83±0.15μm/d、10.47±0.2μm/d,各组间比较差异有非常显著意义(p＜0.01)。 结论:在犬硬腭骨膜牵张过程中ACT A可能通过直接或间接方式增强膜内成骨,FS参与对ACT A生物活性的调节,ACT A/F S系统起重要调节作用。新骨形成是沿牵张方向的膜内成骨方式完成的,在骨膜牵张器放置20天牵张区已有新骨形成,随着牵张时间延长成骨量逐渐增加,40天的成骨活动最活跃,至60天时新骨钙化程度较成熟,以骨改建和塑形为主。本研究通过制造腭裂的动物模型后,在腭裂的裂隙缘安放自行设计的镍钛记忆合金牵张器,经过镍钛合金的记忆效应牵张骨膜,以原位产生新骨,最终在骨膜下形成新骨,表明了骨膜牵张能够在口腔颌面部形成一定的新骨。
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R782

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本文编号：2647797