牙菌斑尿素代谢与尿素酶基因表达的研究

发布时间：2020-05-05 09:55

【摘要】：从唾液和龈沟液中持续分泌的尿素被口腔细菌尿素酶快速分解产生氨和二氧化碳。尿素水解的碱性产物通过中和细菌产酸以维持牙菌斑的中性pH值环境，有助于稳定牙菌斑菌群平衡，，防止牙釉质脱矿和促进牙釉质再矿化。因此，尿素水解被认为对防止龋病发生起到了重要作用。迄今为止，关于牙菌斑中哪些细菌具有尿素酶活性以及哪些细菌决定牙菌斑尿素酶活性的问题尚不清楚，对口腔细菌尿素酶基因表达的调控机制缺乏认识。本研究首先对牙菌斑中常驻细菌进行尿素酶活性检测，比较细菌间尿素酶的酶促动力学特征，寻找决定牙菌斑尿素酶活性的关键细菌。在此基础上，以内氏放线菌作为研究对象，了解细菌尿素代谢的生物学特征，模拟内氏放线菌在牙菌斑中的生物膜状态，探索环境因素和生存状态对细菌尿素酶活性和尿素酶基因表达的影响。 方法 采用连续培养的恒化器模型培养内氏放线菌单菌种生物膜，使用酶底物反应法和Real-time PCR技术分别在生化水平和基因水平检测氮源物质、糖源物质、pH值和清除率对尿素酶活性和尿素酶UreC基因表达的影响，同时比较细菌在膜状态下和浮游状态下尿素酶活性和尿素酶UreC基因表达的差异。 结果 研究发现，牙菌斑生物膜中细菌有活跃的尿素代谢活动，唾液链球菌，内氏放线菌能稳定表达尿素酶活性，血液链球菌和粘性放线菌尿素
【图文】：

四川大学华西口腔医学院博士学位论文1’“一萝)塑解谧拭璐2，533.54，555，566，577‘588.599.51010.511PH仇不同pH值下内氏放线菌尿素酶活性的变化Fig1.UreaseactiviytofActinomyeeSnaeslundiiatdiefferntPHvalueS随着尿素底物浓度的增高，内氏放线菌尿素酶催化活性迅速增高。当尿素浓度增加到50~。FL时，底物浓度再继续增加，催化活性的增加率减小，活性趋于最大值(vmxa)(图2)。使用统计学分析拟合酶活性倒数与底物浓度倒数的直线回归方程，线性相关性良好(二0.993)，得到米氏常数K」11=7.5~olL/。说明在尿素浓度在7.5~。比时，内氏放线菌尿素酶具有50%的最大活性。根据Lin~vae-rBkur方程式:1瓜二K的叮m[1s+lV/m，得到vmxa=55·6nnlol/浏而mgecnProetni。经计算，在口腔中正常尿素浓度3一10mmol几范围内，尿素酶活性大约保持在最大活性的21%~63%。一八U00060心J戎呼、j，工月叫。公。向二工勺。留活叫.绷鹅五瀚毅送》10叁。031020406030100120尿素浓?

2实验设备pH控制仪(Jneoc，上海任氏电子有限公司)BTOO一6OOM型八通道蠕动泵(保定兰格恒流泵有限公司)YZ15巧型单通道蠕动泵(保定兰格恒流泵有限公司)PI一600一lpH电极(eJnc，o上海任氏电子有限公司)HX一1050型循环水浴箱(北京博医康技术有限公司)培养罐(contimiousculurtevessel，四川大学玻璃仪器制造CJJ一781型磁力加热搅拌器(江苏振兴仪器厂)HTSPlus多孔板高效分析仪(美国PE公司)紫外光分光光度计(752C上海第三分析仪器厂)氨试剂盒(北京柏定生物制剂有限公司)MRC一1024ConofealLaserSeanJ苗ngMieorsePoe(BioRad)
【学位授予单位】：四川大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2006
【分类号】：R781.4

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本文编号：2649932