牙龈卟啉单胞菌上清液对人脐静脉内皮细胞分泌炎性因子的影响

发布时间：2020-05-06 14:06

【摘要】：[目的]研究牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis, P.g)上清液对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)增殖及其炎性因子IL-1β及IL-6表达的影响,为探讨牙周炎与动脉粥样硬化(atherosclerosis, As)的关系及其机制提供实验依据。 [方法]采用酶消化法法进行HUVECs原代培养,并进行细胞来源鉴定；厌氧条件下培养并获得牙龈卟啉单胞菌P.g；用MTT法检测不同浓度的P.g上清液对HUVECs增殖的影响,根据MTT结果选择浓度为0.5×107CFU/ml的P.g上清液刺激HUVECs,透射电镜观察细胞超微结构的改变,并分别在培养后6h、12h、18h、24h时采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定培养液上清中IL-1β及IL-6的水平;同时分别在培养后6h、12h、18h、24h通过逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测IL-1β、IL-6基因的表达变化。应用SPSS11.0软件包采用直线回归和方差分析对结果进行分析。 [结果](1)本实验研究条件下所获得的HUVECs,呈单层“铺路石”样排列,免疫组化法可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。 (2)与空白对照组相比较,高浓度的细菌上清液(4.0×107CFU/ml,2.0×107CFU/ml,1.0×107CFU/ml,)可明显抑制HUVECs增殖(P0.05),而在相对低浓度时(0.5×107CFU/ml,0.25×107CFU/ml,1.25×106CFU/ml,6.25×105CFU/ml)则对HUVECs增殖无明显抑制作用(P0.05)。 (3)用0.5×107CFU/ml的细菌上清液刺激HUVECs 24h后,透射电镜下细胞超微结构在形态上与空白对照组相比有轻微的损伤性改变,部分细胞可见扩张的线粒体,且伴有线粒体嵴溶解,部分细胞内可见内质网增多。 (4) ELISA实验结果显示,HUVECs在无P.g上清液刺激的情况下也可表达低水平的IL-1β和IL-6,在浓度为0.5×107上清液的刺激下,HUVECs的IL-1β水平在18h、24h时显著增高,并且明显高于对照组(P0.05)；HUVECs的IL-6水平在12h、18h显著增高(P0.05),并且在12h、18h、24h三个时段明显高于对照组(P0.05),而对照组间不同时间段其表达量无显著性差异(P0.05)。 (5)RT-PCR实验结果显示,在浓度为0.5×107的P.g上清液刺激下,HUVECs在6h、12h、18h、24h后细胞内均有IL-1p、IL-6的基因的表达,IL-1β在12h、18h的表达明显高于对照组(P0.05),IL-6在12h的表达明显高于对照组(P0.05),而对照组间不同时间段其表达无显著性差异(P0.05)。 [结论]高浓度的P.g上清液可明显抑制HUVECs的增殖,在浓度为0.5×107的P.g上清液刺激下,HUVECs的超微结构有轻微的损伤性改变,并且可促进致炎因子IL-1β和IL-6的蛋白及基因表达,提示P.g感染可能促进内皮细胞分泌炎症因子增加,导致内皮细胞功能紊乱,从而可能在As的发生发展中起一定作用。
【图文】：

5.1P.g上清液对HUvECs分泌IL一lp的影响，见表2及图14。结果显示，HUvECs在无Rg上清液刺激的情况下也可少量表达IL一lp，在浓度为0.5、107上清液的刺激下，HUvEcs的IL-lp水平在18h、24h显著增高，并且明显高于对照组(P<0.05)，而对照组间不同时间段分泌水平无显著性差异(P>0.05)。表2P.g上清对HUvECs生成ILlp的影响(浓度p留ml，x士s，n=6)6h1Zh1sh24h实验组对照组30.72士0.9730.41士0.70.58士1..95士0..55士1.70*△.12士0.4634.3008士1.45*△.99士0.34口、J，1.，J，J460O夕.、曰2nU，j内」注:*表示与对照组比较，△表示与6h组比较，P<0.05P<0.05

5.2P.g上清液对HIJvECs分泌IL一6的影响，见表3、图15。结果显示，HUVECs在无P.g上清液刺激的情况下也可少量表达IL一6，在浓度为0.5xl07上清液的刺激下，HUvEcs的IL一6水平在12h、18h显著增高，在24h时段水平有所降低，但依然明显高于对照组(P<0.05)，而对照组间不同时间段其分泌水平无显著性差异(P>0.05)。表 3P.g上清对HIJVECs生成IL·6的影响(浓度pg/ml，x士s，n=6)12h18h24h实验组对照组277.87士14.31261，34士 15.13304.54士21.47*△269.34士20，45 315.21士10.93*△271.47士9.69277.34士4.15*263.26士 11.44注:*表示与对照组比较，，△表示与6h组比较，P<0.05P<0.05
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R781.4

【参考文献】

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本文编号：2651387