流式细胞术检测无镍奥氏体不锈钢对L929细胞凋亡的影响

发布时间：2020-05-08 23:26

【摘要】： 目的 金属合金作为口腔修复材料应用于人体内,在人体生理环境中使用,对生命有机体会产生一定的作用和影响。生物相容性评价是研究医用金属材料生物性能的重要内容之一,目前新材料在用于人体之前都要求必须经过全面的生物相容性检测。无镍奥氏体不锈钢(BIOSSN4)是中科院金属研究所研制的一种新型的医用金属材料,这种材料优良的机械性能已经通过实验得到验证,但其生物相容性还需要进一步的研究。本实验就是从生物学角度,通过细胞培养及流式细胞仪检测,来了解无镍奥氏体不锈钢和其他4种医学常用的金属合金对L929细胞凋亡的影响,通过比较,进而评价一下无镍奥氏体不锈钢的生物相容性。 材料与方法 1、细胞培养 小鼠成纤维细胞L929用含10%胎牛血清的RPMI1640细胞培养基在37℃、5%CO2的培养箱中培养并传代。 2、流式细胞仪检测细胞在凋亡不同阶段的凋亡数量 将5种金属合金(无镍奥氏体不锈刚、317L奥氏体不锈钢金合金、钻铬合金、镍铬合金、金合金)及阴性对照组的浸提液与L929细胞联合培养24、48小时后分别进行EGFP, PI双染色,然后通过流式细胞仪检测不同实验组细胞在凋亡不同时期的凋亡率。 3、荧光显微镜下观察凋亡细胞 滴一滴上述各组染色后的细胞悬液于载玻片上,并用盖玻片盖上细胞,分别于荧光显微镜下观察Annexin V-EGFP荧光信号呈绿色,PI荧光信号呈红色。 结果 实验组细胞经AnnexinV-EGFP和PI双染色后,荧光显微镜观察可见细胞在凋亡不同时期的形态变化。流式细胞仪检测结果表明各实验组引起的细胞凋亡率是不同的。其中金合金组细胞凋亡率最低并且接近阴性对照组,无镍奥氏体不锈钢组引起的细胞凋亡率与金合金组较接近,其它金属合金凋亡率均高于金合金组,其中镍铬合金引起的凋亡率最高且远高于金合金组,其凋亡率由低到高的顺序为：金合金无镍奥氏体不锈钢钴铬合金317L奥氏体不锈钢镍铬合金。 结论 1、各实验组生物相容性由好到差的顺序依次为：金合金、无镍奥氏体不锈钢、钴铬合金、317L奥氏体不锈钢、镍铬合金。 2、无镍奥氏体不锈钢可考虑应用于临床。
【图文】：

各实验组加样培养48小时后细胞形态

各实验组流式细胞仪检测48小时后的散点图
【学位授予单位】：中国医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R783.1

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本文编号：2655203