正畸力下牛乳铁蛋白对牙周病骨吸收及牙移动骨改建的影响

发布时间：2020-05-10 19:41

【摘要】：目的:通过建立大鼠牙周病及正畸牙移动动物实验模型,研究各组大鼠实验牙压力侧牙周组织和骨密度变化;观察牙周组织中RANKL、OPG、TNF-α、COX-2的表达及破骨细胞数目变化规律;以期探讨牛乳铁蛋白对正畸力下牙周病骨吸收及牙移动骨改建的影响。方法:1.选取健康雄性8-10周龄SD大鼠12只,随机选取6只大鼠作为实验组,10%水合氯醛麻醉后,于上颌左侧第一磨牙近中颊根近中及颊侧牙龈注射含10g/L脂多糖(Escherichia coli lipopolysaccharides,E-LPS)的生理盐水50μl,每48小时注射1次,共4次,剩下6只大鼠作为空白对照组。8天后对比观察实验组和对照组大鼠上颌左侧第一磨牙牙龈及牙周组织炎症情况,并处死所有大鼠,取左上颌牙体-牙周组织联合标本,4%多聚甲醛固定,Micro-CT观察两组大鼠牙槽骨骨吸收情况,组织病理切片、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及破骨细胞计数检查牙周病模型制备的效果。2.选取健康雄性8-10周龄SD大鼠52只,随机分为三组:A组:空白对照组(4只);B组牙周病正畸牙移动模型组(24只);C组正畸牙移动模型组(24只),其中,B组又分为B1组:LPS+正畸力+牛乳铁蛋白(12只);B2组:LPS+正畸力+生理盐水(12只),C组又分为C1组:正畸力+牛乳铁蛋白(12只);C2组:正畸力+生理盐水(12只)。B组大鼠根据实验一牙周病模型制备结果,于相同位置下注射含10g/L LPS的生理盐水50μl,每48小时注射1次,共4次。C组大鼠同时在相同部位注射等体积生理盐水。注射4次后各组均安装NiTi拉簧装置,力值20g,自正畸牙移动模型建立第2天开始对B2、C2组大鼠每日灌胃0.9%氯化钠溶液(1ml/100g)。同时,按照1ml/100g灌胃量,根据每只大鼠每天接受的牛乳铁蛋白剂量为85mg/Kg,将牛乳铁蛋白溶解于相应体积0.9%氯化钠溶液中对B1、C1组大鼠进行灌胃。在灌胃后的第5天、14天,B1、B2、C1、C2组各处死大鼠6只,共48只,A组大鼠适应性喂养一周后,直接处死取材,各组大鼠处死前取上颌左侧第一磨牙近中龈沟液,ELISA法定量检测龈沟液乳铁蛋白含量。取材固定,Micro-CT测量实验牙近中颊根牙槽骨骨密度、骨小梁等骨组织相关指标变化。HE染色观察实验牙压力侧牙周组织的变化和牙槽骨吸收情况。TRAP染色观察实验牙压力侧破骨细胞分布与数量。免疫组织化学染色法观察实验牙压力侧牙周组织中RANKL、OPG、TNF-α、COX-2的表达情况,应用Image-pro-plus6.0图像分析系统进行半定量分析。采用SPSS22.0统计软件对实验结果进行分析和处理。结果:1.成功建立了大鼠牙周病模型,局部注射大肠杆菌菌株LPS可有效制备大鼠牙周病骨吸收动物模型。2.成功建立了大鼠机械力诱导下的正畸牙移动模型。3.各组大鼠实验牙近中侧龈沟液中,均检测到乳铁蛋白的表达。牛乳铁蛋白灌胃组和生理盐水灌胃组分别和空白组相比,其中牛乳铁蛋白灌胃组龈沟液乳铁蛋白含量显著高于空白组,差异有统计学意义(P0.05),生理盐水灌胃组和空白组相比,差异无统计学意义(P0.05)。4.Micro-CT结果显示:第5天和第14天,B1组骨小梁数量(TrabecularNumber,Tb.N)、骨小梁厚度(Trabecular Thickness,Tb.Th)高于B2组,骨表面积和骨体积的比值(Bone Surface/Bone Volume,BS/BV)、骨小梁分离度(Trabecular Separation/Spacing,Tb.Sp)低于B2组,差异具有统计学意义(P0.05);C1组与C2组相比,Tb.N、Tb.Th、BS/BV和Tb.Sp差异无统计学意义(P0.05)。5.HE染色结果显示:A组未见明显的破骨细胞和牙槽骨吸收;B组和C组均发生了较为明显的压力侧牙槽骨吸收,B2组较B1组牙槽骨吸收更为严重,表现为牙周膜纤维排列紊乱,牙槽骨表面不连续,破骨细胞及骨吸收陷窝形成,结缔组织内中性粒细胞、淋巴细胞等炎症细胞浸润,C1组和C2组相比没有明显区别。6.TRAP染色结果显示,A组TRAP染色阴性,未见明显的成熟破骨细胞。第5天和14天时,受牛乳铁蛋白影响,B1组成熟破骨细胞数显著低于B2组,差异有统计学意义(P0.05);C1、C2组压力侧可见成熟破骨细胞,差异无统计学意义(P0.05)。7.免疫组化结果显示:第5天和14天时,B1组RANKL、TNF-α表达量显著低于B2组(P0.05),B1组OPG表达量高于B2组(P0.05),于第5天达到峰值;C1、C2组相比,第5天和14天,RANKL、TNF-α、COX-2和OPG表达量相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:正畸力下,牛乳铁蛋白可能通过影响LPS/TLR4/TNF-α通路抑制牙周病相关骨吸收,但不影响机械力通过COX-2/PGE2通路引起的相关骨改建。
【图文】：

近中有明显的牙槽骨吸收（图 1-1），牙槽骨高度降低，牙根暴露。空白对照组大鼠左侧上颌骨重建三维影像显示未见明显异常骨吸收（图 1-2）。图 1-1 牙周病组显微 CT 三维重建图Fig1-1 Microscopic CT three-dimensional reconstruction of periodontitis groupPB

正畸力下牛乳铁蛋白对牙周病骨吸收及牙移动骨改建的影响 2016 级硕士学位论文射 LPS 第 4 次后出现牙周组织红肿，探诊深度增加，触之易出血，体重稍增加，活动量减少，空白对照组大鼠牙周组织无红肿，食欲无明显变化，，体重增加，毛色光亮，活动正常。2.2 Micro-CT 下观察局部牙槽骨吸收情况实验组大鼠左侧上颌骨 CT 重建三维影像显示，上颌第一磨牙颊侧及近中有明显的牙槽骨吸收（图 1-1），牙槽骨高度降低，牙根暴露。空白对照组大鼠左侧上颌骨重建三维影像显示未见明显异常骨吸收（图 1-2）。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R783.5

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本文编号：2657797