与胫骨生长板软骨细胞共培养条件下髁突软骨细胞生物学特性的研究

发布时间：2020-05-12 11:26

【摘要】：[目的]建立SD大鼠髁突软骨细胞(Mandibular condylar chondrocytes,MCC)与胫骨生长板(Tibial growth plate, TGP)软骨细胞共培养模型,探讨共培养环境对髁突软骨细胞生物学特性的影响,为髁突生长发育及软骨细胞源性组织工程研究提供依据。 [方法]用Transwell?插入式培养小室间接共培养方式及同一培养瓶直接混合共培养的方式分别对3周龄雌性SD大鼠的髁突软骨细胞和胫骨生长板软骨细胞进行非接触性及接触性体外共培养。以CFSE荧光染色剂标记直接共培养体系中的髁突软骨细胞,保证在直接混合共培养条件下仍能有效区分两种细胞。设立不同比例细胞共培养实验组、髁突软骨细胞独立培养对照组、胫骨生长板软骨细胞独立培养对照组,对各组第二代细胞行组织学观察及细胞增殖观测,并采用PT-PCR和免疫组织化学技术检测软骨细胞基质内Ⅰ型胶原(Type Ⅰ collagen, Col Ⅰ)、 Ⅱ型胶原(Type Ⅱ collagen, Col Ⅱ含量的变化。取两种细胞的原代细胞分别以独立及等量混合的方式进行无支架离心管培养,观察各组生成组织软骨的功能情况。 [结果]间接共培养或直接共培养方式下两种软骨细胞生长增殖率无差异。与MCC独立培养对照组相比,不同比例MCC与TGP软骨细胞直接共培养实验组细胞基质中Ⅰ、Ⅱ型胶原含量,经免疫组化及RT-PCR技术检测,表现为共培养各组Ⅱ型胶原含量均有增加,Ⅰ型胶原含量随加入TGP软骨细胞比例的增加而减少。运用无支架离心管培养技术体外培养至2周,MCC和TGP软骨细胞共培养组培养物及TGP独立培养组培养物可形成软骨样组织结构,经Ⅱ型胶原免疫组化染色呈阳性表达；之后混合细胞组由中心区域开始逐渐失去组织结构,电镜下观察到细胞凋亡,细胞器出现水肿、肥大；而TGP组组织结构可维持至第4周,组织形态无明显变化,电镜下观察到少量钙化。 [结论]本研究中,单层共培养条件下的MCC和TGP软骨细胞均生长良好,分泌与合成功能正常,提示共培养环境对两种细胞均无病理性损害作用,可提高基质内Ⅱ型胶原的含量。两种细胞在无支架离心管立体共培养中,TGP软骨细胞的加入有助于MCC形成软骨结构。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R782.4

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 周强,李起鸿,戴刚,杨柳;高数量骺板软骨细胞聚集培养生成软骨组织的观察[J];第三军医大学学报;2002年05期

2 宇丽,候宜,姜金兰,颜炜群,杨同书,侯立中;软骨细胞外基质对生长板软骨构建的影响[J];中国地方病防治杂志;2000年06期

3 熊红珍;赵华;王小娟;包丽娜;万贤凤;李松;;髁突与生长板软骨发育早期组织学特征的比较研究[J];广东牙病防治;2011年04期

4 张金宁,王旭东,杨驰;猕猴耳廓软骨细胞体外不同的培养方式与生长活性[J];口腔医学纵横;2000年04期

5 段小红,毛勇,徐可为;三种立体培养软骨细胞方式的比较研究[J];口腔医学研究;2003年01期

6 郑伟,汪宝军,叶立民;灰度值、光学密度值与免疫组化片阳性表达强弱的关系[J];临床与实验病理学杂志;2003年05期

7 白轶;陈亮;;兔脂肪源干细胞与牙周膜成纤维细胞共培养的实验研究[J];临床口腔医学杂志;2012年10期

8 颜炜群,佟明华,宇莉,余涛,侯立中,杨同书,高贵,张家颖;培养软骨细胞再形成生长板样软骨组织的研究[J];实验生物学报;1994年02期

9 王珊青;徐剑炜;;干细胞共培养的方法及其分化诱导[J];中国组织工程研究与临床康复;2007年11期

10 张勇;赵建宁;;组织工程软骨细胞体外培养技术要点[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年42期

，

本文编号：2660144