模拟微重力对SD大鼠髁突软骨细胞去分化影响的实验研究

发布时间：2020-05-15 07:02

【摘要】：[目的]通过建立模拟微重力环境,在体外对SD大鼠髁突软骨细胞进行三维培养,探讨模拟微重力环境对软骨细胞生物学特性的影响,为髁突软骨组织工程的种子细胞培养提供研究基础。[方法]取出生l-3d的SD大鼠的髁突软骨组织块进行体外培养,获得髁突软骨细胞,继续进行传代培养,取第3代细胞进行甲苯胺蓝染色、II型胶原免疫组化染色进行鉴定。取第6代髁突软骨细胞接种于微载体cytodex-3上,放入The Rotary Cell Culture SystemTM(RCCS)旋转细胞培养系统所模拟的微重力环境中进行培养;以同一批同体积接种了细胞的微载体置于地面静止条件下进行对照培养。培养7d后,倒置相差显微镜及扫描电镜下观察,并提取两组细胞的总RNA,进行Real-time Quantitative-PCR检测,对比两组细胞的成软骨相关基因Sox9,col-IIαl,Aggrecan及与软骨细胞去分化倾向相关的col-I αl表达的差异。[结果]1.采用组织块培养法获取的P1代髁突软骨细胞,呈多角形,细胞核大而圆,排列紧密,呈“铺路石”样。P3代髁突软骨细胞,形态与原代细胞相似,生长曲线呈S型,具有较好的增殖能力,对细胞进行甲苯胺蓝染色及II型胶原免疫组化染色均为阳性。P6代时,长梭形细胞的比列明显增高,呈“鱼群”状排列,呈现去分化形态。2.采用倒置相差显微镜及扫描电镜观察微载体cytodex-3上髁突软骨细胞,可见细胞黏附在微载体上,并有效的生长及增殖。3.在模拟微重力环境中培养髁突软骨细胞7d,髁突软骨细胞col-Iαl,col-Ⅱα1,Aggrecan的mRNA的表达量低于地面静止状态下的培养,而Sox9的mRNA表达量相对升高。[结论]1.采用组织块培养法建立髁突软骨细胞的体外培养模型成功有效。2.髁突软骨细胞可黏附在微载体cytodex-3的表面进行生长增殖,cytodex-3能有效增加培养空间,利于髁突软骨细胞进行扩增培养。3.微重力生物反应器内培养髁突软骨细胞,软骨细胞去分化倾向相关基因表达降低,去分化速度得到延缓。成软骨相关上游基因表达升高,表明微重力对软骨细胞表型的维持具有一定意义。
【图文】：

细胞,紧密连接,边界,倒置显微镜

起初单个散在生长，生长至３ｄ时，成簇形态明显，细胞簇之间间隙较大。培养逡逑至５－７ｄ时，细胞簇之间开始融合，细胞与细胞开始紧密连接，细胞形态差别较逡逑大。（图２）逡逑■逡逑图２．第三代ＭＣＣ细胞成簇生长，细胞紧密连接，边界清晰。（Ａ邋：倒置显微镜逡逑ｘｌＯＯ邋Ｂ：倒置显微镜ｘ４００）逡逑１３逡逑

铺路石,细胞,倒置显微镜,显微镜

图１第一代髁突软骨细胞，细胞较圆，胞核较大，呈“铺路石”样结构（Ａ邋：倒．逡逑置显微镜ｘｌＯＯ邋Ｂ：倒置显微镜＞＜４００）逡逑第三代髁突软骨细胞接种６ｈ后贴壁基本完成，细胞呈多角形，形态不规则。逡逑起初单个散在生长，生长至３ｄ时，，成簇形态明显，细胞簇之间间隙较大。培养逡逑至５－７ｄ时，细胞簇之间开始融合，细胞与细胞开始紧密连接，细胞形态差别较逡逑大。（图２）逡逑
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R782.6

【参考文献】