细胞角蛋白19和细胞间隙连接蛋白43在4NQO诱发大鼠舌黏膜癌变中的表达

发布时间：2020-05-16 23:17

【摘要】：目的：口腔癌占全身恶性肿瘤的3%-5%,居头颈部恶性肿瘤的第二位；约90%以上为鳞状细胞癌,5年生存率在50%左右。一般认为口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)多由口腔癌前病变发展而来,早发现、早诊断和早治疗是目前提高口腔鳞状细胞癌患者生活质量和生存率的关键所在。近年来,随着医学科学技术的发展,肿瘤标志物检测成为一项肿瘤诊断的新手段,对于早期诊断有着独特的作用,成为了肿瘤学中备受关注的新领域。目前尚未找到一种特异性强,敏感度高的指标,选择一些特异性较高的肿瘤标志物联合检测某一肿瘤,将优于单一指标的检测。细胞角蛋白(cytokeratin,CK)19是构成细胞骨架的一种酸性多肽,是分子量最小的细胞角蛋白,主要表达于单层上皮的上皮细胞,也散在表达于复层鳞状上皮的基底层细胞。国内外许多研究者在多种癌组织中检测到CK19的异常表达,认为其可作为早期诊断癌的辅助指标。在口腔黏膜癌变过程中口腔鳞癌组织恶性程度越高,CK19表达越强,随癌变程度加重CK19表达增加,其也可作为诊断OSCC分化程度的辅助指标。肿瘤是一种增殖失控和分化紊乱的疾病,肿瘤发生过程中的任何一个步骤受到阻断都有可能抑制肿瘤的发展。已有的研究发现,肿瘤细胞和转化细胞普遍存在细胞间隙连接通讯(gap junctional intercellular communication, GJIC)的缺陷。多数肿瘤细胞中GJIC功能降低或丧失,连接蛋白胞内表达或不表达,而恢复GJIC可以抑制肿瘤生长,GJIC已成为研究肿瘤预防与治疗的潜在靶点之一。众多学者们认为在肿瘤的形成过程中,GJIC功能缺陷或丧失使始发癌变细胞失去周围正常细胞的生长调控而无限生长,最终发展成肿瘤。在细胞间隙连接蛋白(connexin, Cx)家族中Cx43分布最为广泛,受到了广泛关注和深入研究。近年来的研究发现,Cx43蛋白在多种正常组织中高表达,但在相应的癌组织中出现表达下调、异位表达甚或表达缺失。GJIC缺陷与肿瘤的发生发展密切相关,但与口腔黏膜癌变的相关性的研究资料较少。本实验利用4-亚基硝氧喹啉(4-nitroquinoline-1-oxide,4NQO)诱导SD大鼠的口腔黏膜癌变,获取正常口腔黏膜、癌前病变及口腔鳞癌各阶段的舌组织,运用免疫组织化学的方法检测CK19、Cx43在口腔黏膜癌变过程中各阶段的动态变化,分析CK19、Cx43与口腔黏膜癌变的关系,判断CK19与Cx43在口腔黏膜癌变过程中是否有相关性。方法：58只雄性SD大鼠,7周龄,体重200±10g,SD大鼠和饲料购自泸州医学院实验动物中心。58只SD大鼠同室随机3-4只分装到内有垫料的塑料盒内饲养,温度为23±2℃,相对湿度为55±5%,光照为12L：12D。实验组48只大鼠使用常规饲料喂养,饮用水中加入4NQO(40ppm)诱癌,第9、12、18、22周分批处死,取舌体组织；对照组10只大鼠使用常规饲料喂养,饮自来水,第22周处死,取舌体组织。用4%的中性甲醛固定液固定,石蜡包埋,做4μm厚的连续切片,由两位有经验的病理医师对HE染色切片进行病理诊断。用兔抗大鼠CK19(M259)多克隆抗体及兔抗大鼠Cx43(S369)多克隆抗体,采用SP法进行免疫组化染色。统计分析采用SPSS13.0统计软件完成。结果：1.在大鼠正常舌黏膜组织中,CK19阳性染色的细胞散在分布于黏膜基底层,基底上层不表达；随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加,CK19表达于黏膜基底上层；在OSCC组织中,CK19阳性染色细胞分布在黏膜各层,浸润到黏膜下组织的癌细胞也呈阳性染色。2.CK19表达强度的变化在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、口腔鳞癌组织中阳性表达率分别为30.00%(3/10)、50.00%(7/14)、58.33%(7/12)、80.00%(8/10)、91.67%(11/12),经统计分析P0.05,具有统计学意义,说明随着病变程度加重,CK19表达强度增强,阳性率增加。3.在正常舌黏膜中Cx43蛋白主要表达于大鼠舌黏膜上皮细胞的胞膜上,上皮的基底层、棘层和颗粒层呈阳性染色,角质层未见表达；随着大鼠舌黏膜上皮异常增生程度的增加Cx43的表达明显下降；在OSCC组织中,Cx43阳性染色分布于癌细胞胞浆以及鳞癌组织中的角化珠内。4.Cx43表达强度的变化在正常舌黏膜、轻度上皮异常增生、中度上皮异常增生、重度上皮异常增生、口腔鳞癌组织中阳性表达率分别为100.00%(10/10)、85.71%(12/14)、66.67%(8/12)、40.00%(4/10)、33.33%(4/12),经统计分析P0.05,具有统计学意义,说明在正常舌黏膜、上皮异常增生和口腔鳞癌组织中Cx43表达随着病变程度增加而显著降低。结论：1.4NQO诱发大鼠舌黏膜癌变过程中,CK19蛋白表达水平随病变程度加重显著升高,提示CK19与口腔上皮细胞的癌变有关；CK19的异常表达可作为早期诊断OSCC的辅助指标之一。2.4NQO诱发大鼠舌黏膜癌变过程中,Cx43蛋白表达水平随病变程度加重显著下降,提示Cx43表达异常参与了口腔黏膜的癌变过程；Cx43表达下降是口腔黏膜癌变的早期事件。3.在大鼠舌黏膜癌变发展中,CK19与Cx43蛋白表达呈负相关,CK19和Cx43的联合检测对OSCC的早期诊断有重要的作用,有利于提高OSCC早期诊断的灵敏度和特异性。
【图文】：

前牙,口腔,病例,溃疡

否认慢性疾病史及药物过敏史，否认家族遗传史。检查见上唇乳膜充血水肿，有多个溃疡，可见白色斑纹样改变。溃疡部位与银汞合金充填物位置相吻合(图1)。诊断:口腔乳膜苔醉样病变。治疗过程:使用复方一氯己定含漱液和曲安奈德，去除牙颈部，通讯作者:聂敏海Tel:0830一2636617口腔苔醉样病变 (OralLICheno记玫sions，OLL)是一种与口腔扁平苔鲜相类似的病变，两者在组织病理学及临床等方面有诸多相似之处，鉴别困难;也有学者将其定义为诱因明确的口腔扁平苔鲜的亚型。OLL的发生，有的病例与牙科用金属修复材料有关:有的病例与口服药物有关，如抗生素类、抗高血压药和治疗糖尿病的药物等;有些病例为某些系统性疾病的并发症或表征

溃疡,前牙,口腔,氯己定

复合体充填。治疗2周后复查白色条纹病损消退大半，临床症状明显好转并逐渐痊愈(图2)。讨论图1上颁前牙银汞合金充填后上唇乳膜苔醉样病变图2上领前牙楔状缺损改用卿复合体充填后临床资料患者，女，63岁，因”口腔反复溃疡，近期加重5d”就诊。患者20年前因上颁前牙牙颈部楔状缺损龋坏，用银汞合金充填。2年前开始上唇乳膜反复出现溃疡，可自愈:近来发作频繁，影响进食。否认慢性疾病史及药物过敏史，，否认家族遗传史。检查见上唇乳膜充血水肿，有多个溃疡，可见白色斑纹样改变。溃疡部位与银汞合金充填物位置相吻合(图1)。诊断:口腔乳膜苔醉样病变。治疗过程:使用复方一氯己定含漱液和曲安奈德
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R781.57

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