人细胞色素P450 2A13基因在口腔癌中表达的研究

发布时间：2020-05-23 21:56

【摘要】：目的比较分析细胞色素P450 2A13 mRNA和蛋白分别在口腔癌组织及其对应癌旁组织中的表达水平,探讨细胞色素P450 2A13与口腔癌的相关性及其临床意义。方法采用实时定量PCR技术检测26例口腔癌组织及其对应癌旁组织中细胞色素氧化酶P4502A13 mRNA表达情况。采用CEQ8000测序仪对实时定量PCR产物进行测序,鉴定PCR产物的特异性。采用Western-blotting技术对26例口腔癌及其对应癌旁组织中CYP2A13的蛋白表达情况进行定性分析。实时定量PCR结果采用SPSS14.0统计软件对数据进行统计学处理,进行秩和检验分析。同时分析CYP2A13表达情况与各临床生物学特征的关系。结果1.荧光定量PCR技术对CYP2A13 mRNA的表达情况进行了定量分析:(1)CYP2A13mRNA在口腔癌组织中的表达为22.1731,低于其在对应癌旁组织中的表达30.8269(P=0.0202),差异有统计学意义。(2)CYP2A13mRNA在口腔癌组织中的表达:①男性患者癌组织中的表达12.3846,女性患者癌组织中的表达14.6154(P=0.2397),差异无统计学意义;②年龄≤55岁患者癌组织中的表达9.6,年龄55岁患者癌组织中的表达15.9375(P=0.0204),差异有统计学意义;③有转移患者癌组织中的表达11.7692,无转移患者癌组织中的表达15.2308(P=0.1321),差异无统计学意义;④高分化患者者癌组织中的表达13.9524,中低分化患者者癌组织中的表达11.6(P=0.2847),差异无统计学意义;⑤早期(Ⅰ+Ⅱ)患者者癌组织中的表达17.375,中晚期(Ⅲ+Ⅳ)患者者癌组织中的表达11.7778(P=0.0452),差异有统计学意义。2. Western-blotting技术对CYP2A13的蛋白表达情况进行定性分析:口腔癌组织中CYP2A13蛋白的表达量明显低于其在对应的癌旁组织中的表达量。组织标本中CYP2A13蛋白的表达量与mRNA的表达量基本一致,进一步验证了与CYP2A13 mRNA表达的组织一致性。结论本次研究表明,CYP2A13在口腔癌组织中表达降低,结合CYP2A13的功能,说明CYP2A13的表达水平差异是口腔癌发生发展的分子基础,CYP2A13可能在口腔癌的发生发展过程中起着重要作用。CYP2A13在癌组织中的表达降低可能是口腔癌发生发展过程中的自我保护效应。而该基因表达水平的下调对肿瘤转归的影响有待于进一步研究。
【图文】：

口腔癌,高分化,低分化,HE染色

10图 5-1 低分化、中分化、高分化口腔癌 HE 染色箭头所指为肿瘤细胞标记处为角化Figure5-1 poorly differentiat ed (Aand B), moderately differentiated (C and D) , well -differentiated ( E and Foral cancer HEstaining. The narrow direct t he t u mor cells, and the flag “ ”direct the kerati n pearl.

电泳图,口腔癌,电泳,逆转录

三条 rRNA 的清晰条带,并且 18s 条带的强度高于 28s。说明提取 RNA 质量较好，基本无降解（图 5-2-A）。图5-2 口腔癌及癌旁组织RNA抽提及实时定量PCR电泳结果C：舌癌组织 N：癌旁组织Figure5-2 oral cancer and adjacent tissues RNA extraction and real-time quantitative PCR electrophoresisresultsC：cancer tissues N：adjacent tissues3 逆转录产物检测结果以逆转录产物为模板，β-actin 为引物行 PCR 扩增，扩增产物进行 2.0%琼脂糖凝胶电泳，可观察到（图 5-3）220bp 单一清晰条带。证明逆转录产物符合实验要求，，可作为 DNA 模板用于荧光定量 PCR 反应。
【学位授予单位】：桂林医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R739.8

【参考文献】