永生化兔髁突软骨细胞系的建立及其生物学特性的研究

发布时间：2020-05-29 05:42

【摘要】：髁突是颞颌关节的重要组成部分之一，其表层覆盖着由纤维层、增殖层和软骨层组成的纤维软骨，由于颞颌关节特殊的解剖结构和生理功能特点，使得髁突软骨细胞(mandibular condylar chondrocytes，MCCs)在具有一般软骨细胞共性的同时，又在形态、增殖分化、基质合成和分泌等方面表现出独有的特征。随着细胞培养技术的发展，近年国内外已成功地培养了小鼠、兔等多种动物和人的髁突软骨细胞，对其生物学特性有了一定的认识。由于髁突表层纤维软骨的组织特异性，体外培养的MCCs实际上是处于不同分化阶段软骨细胞的混合体，常常表现出不稳定的表型特征，这为研究MCCs生物学特征带来了一定困难。近年基因转染技术发展迅速，一些学者尝试把某些癌基因的全部或片段导入一些具有有限生命的细胞，获得具有稳定表型的永生化细胞系，以便对目的细胞进行长期的研究。 本研究采用逆转录病毒载体转染的方法，将SV40大T抗原基因片段导入原代培养的MCCs，对转基因细胞进行克隆筛选，首次建立了具有稳定软骨表型的、永生化兔髁突软骨细胞系。 研究结果简述如下： 根据SV40大T抗原基因结构特点，选择适当的限制性内切酶，经过PUC19亚克隆，将大T抗原的基因片段导入pLN系列的逆转录病毒载体pLN-M。重组逆转录病毒载体经过转化、鉴定、大量提取和纯化后，采用脂
【图文】：

2.0kb32图1.1.2pNL/sv40酶切鉴定结果:DNA/Hind111mkaror(依次为23.1，，9.4，6.5，4.3，2.3，2.okb)2:EeoRI和BmaHI双酶切(5.3kb，4，3kb)3:KPnl单酶切(4.skb

2341..42Weestmblot检测T抗原的表达1:COS一7;2:转基因细胞(克隆‘A21):3:转基因细胞(克隆D53);4:MCCsT抗原永生化的细胞常表现出T抗察到了T抗原在转基因细胞的胞核中恒T抗原的表达作了进一步的证实。生化中起着重要作用14间。人们发现T抗，与染色质相结合并且被紧密地束缚在密连接在膜的脂质而锚着于细胞表面。T泌的增加，从而使细胞具有无限增殖的能引起一连串的变化vIl。另外，大T抗多个环节，包括与p53、p300、Rb以
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2000
【分类号】：R78

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本文编号：2686493