体外应力对人牙周膜成纤维细胞MMP-1、ALP及VEGF表达影响的实验研究

发布时间：2020-05-31 01:03

【摘要】：[目的]体外分离培养人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts, hPDLFs)。探讨体外不同应力刺激对hPDLFs与正畸牙周组织改建相关的细胞因子基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1, MMP-1)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表达的影响。进一步研究正畸牙移动过程中牙周组织改建的机械生物力学机制。 [方法]采用改良组织块贴附法体外培养hPDLFs并进行细胞传代,通过细胞形态学及免疫组织化学方法对其进行鉴定,为后续应力实验提供细胞。运用Forcel四点弯曲细胞力学加载仪对hPDLFs分别施加动态张、压应力(强度5000μstrain,频率0.5Hz)。按总的加力时间分为0、2、6、12h 4个组。利用免疫荧光技术、激光共聚焦显微镜以及流式细胞仪检测hPDLFs内基质金属蛋白酶-1(MMP-1)碱性磷酸酶(ALP)以及血管内皮生长因子(VEGF)的表达变化；利用Western blot方法检测动态张、压应力对hPDLFs MMP-1蛋白表达的影响。 [结果]采用改良组织块贴附法成功培养出原代牙周膜细胞,并证实所培养的细胞是中胚层来源的hPDLFs。正常hPDLFs均表达MMP-1、ALP及VEGF。动态压应力可导致hPDLFs MMP-1的表达在加力6h组升高,ALP的表达在加力2h组降低。动态张应力可导致hPDLFs MMP-1的表达在加力2h组升高,ALP的表达在加力6h组降低。动态张、压应力均可下调hPDLFs VEGF的表达；动态张应力作用12h后hPDLFs VEGF的表达回升至对照组水平。 [结论]本实验采用改良组织块贴附法成功培养hPDLFs。MMP-1、ALP及VEGF参与hPDLFs机械应力信号传导过程,上述细胞因子表达变化与体外应力性质及加力时间存在相关性。MMP-1及ALP可能作为相关因子参与正畸牙移动牙周组织改建过程。hPDLFs对动态张应力可能适应较快并恢复VEGF的表达而加快牙周组织的改建。
【图文】：

人牙周膜成纤维细胞,传代培养,相差显微镜

结果.人牙周膜成纤维细胞的生长情况原代培养的细胞最快爬出时间为7天，镜下见活性组织块贴壁牢固，周围透亮。细胞芒刺样由组织块向四周放射状生长，靠近组织块处细胞密集，细胞形态不清。细胞团外缘细胞单层生长，形态清晰，呈长梭形，偶见4个细胞突起，胞核清晰，呈类圆或椭圆形。可见少数多角形细胞。传代后4小时见悬浮细胞重新贴壁，呈短梭形。18小时后恢复长梭形，细胞随着数量的增加呈漩涡状、放射状生长。细胞生长4至7天后可以再次传代，一般传至第3代基本看不到多角形细胞。第5一10代hPDLFS性质稳定，形态一致，胞质均匀透亮，生长状况良好，培养至第10代以后细胞生长时间延长，细胞生长至培养瓶的70%一80%需7天左右，胞质出现颗粒，有老化趋势。(图l)，一﨑式处

人牙周膜成纤维细胞,相差显微镜,中胚层,来源

昆明医学院2008级顿}研究生学位论文2.人牙周膜成纤维细胞鉴定细胞波形丝蛋白(vimentin)染色阳性，细胞胞浆呈现棕黄色(图ZA、B)，符合中胚层来源的成纤维细胞特征;细胞角蛋白(Cytokeratill)染色阴性(图ZC、D)，，表明无外胚层来源的细胞。上述结果显示，本实验成功获得中胚层来源的hPDLFs。
【学位授予单位】：昆明医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R783.5

【参考文献】