五黄提取物拮抗内毒素对人牙周膜成纤维细胞毒性作用的实验研究

发布时间：2020-06-10 02:26

【摘要】：根管治疗术(root canal therapy, RCT)是目前牙髓病和根尖周病最有效和最完善的治疗方法。作为根管治疗的重要环节,根管冲洗可去除和控制感染根管内细菌及其代谢产物。五倍子具有抗菌、收敛等功效；黄芩主要有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。本课题拟研制上述两种中药的水提取物复合制剂作为一种新型的根管冲洗剂,并通过体外实验,检测其拮抗LPS(内毒素脂多糖)对人牙周膜成纤维细胞的毒性作用,从而为新型中药根管冲洗剂的研制提供理论基础和实验依据。 目的： 研究不同浓度五黄提取物抑制LPS对牙周膜成纤维细胞的毒性作用,为该新型中药根管冲洗剂的临床应用提供依据。 方法： 本实验采用的细胞是用组织块原代培养而获得的人牙周膜成纤维细胞。实验分为： 实验一：通过MTT法检测不同浓度五黄提取物拮抗LPS对牙周膜成纤维细胞的增殖的影响。取生长状态良好的第5代人牙周膜成纤维细胞接种于96孔板,并随机分为三组,即空白对照组、药物组、LPS组。空白对照组加入DMEM培养液；药物组分别加入各浓度的五黄提取物和LPS,即12.5μg/ml十100μg/ml LPS、25μg／ml十100μg/ml LPS、50μg/ml+100gg/ml LPS；LPS组加入100μg/ml LPS+DMEM培养液。24、48、72小时后,采用MTT法测定各组别每孔吸光度值。 实验二：五黄提取物对LPS刺激牙周膜成纤维细胞分泌的炎症因子TNF-α的影响。取生长状态良好的第5代人牙周膜成纤维细胞接种于24孔板,并随机分为空白对照组、药物组、LPS组。空白对照组加入DMEM培养液；药物组分别加入各浓度的五黄提取物和LPS,即12.5μg/ml＋100μg/mlLPS、25μg/ml十100μg/ml LPS和50μg/ml+100μg/ml LPS;LPS组加入100μg/ml LPS+DMEM培养液。于第12、24和48小时吸取上清液,4℃离心、分装,并放入-20℃低温冰箱冻存待检。采用ELISA试剂盒检测上清液中TNF-a的水平。 结果： 1.100μg∥ml LPS在24h、48h、72h与空白组相比能够明显抑制牙周膜成纤维细胞的增殖活性(p0.05)；在LPS存在的条件下,加入不同浓度的五黄提取物于牙周膜成纤维细胞中,随着时间的延长,与LPS组相比较,不同浓度的五黄提取物在24h、48h均能使牙周膜成纤维细胞的增殖活力明显提高,在72h时仅25μg/m能使牙周膜成纤维细胞的增殖活力明显提高,其中25μg/ml在24h时的效果最明显。 2.与空白组相比,LPS能明显升高牙周膜成纤维细胞分泌TNF-a的水平(p0.05)。在LPS存在的条件下,12.5μg/ml、25gg/ml以及50μg/ml的五黄提取物组均能使人牙周膜成纤维细胞促炎因子TNF-α的分泌明显降低(p0.05),其中25μg/ml的五黄提取物在24h时的作用效果最明显。 结论： 五黄提取物能有效拮抗内毒素对人牙周膜成纤维细胞毒性作用,对牙周膜成纤维细胞具有保护作用。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R781

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本文编号：2705637