机械压力对体外培养大鼠髁突软骨与股关节软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响研究

发布时间：2020-06-11 07:10

【摘要】：目的:在体外培养的髁突软骨细胞和股关节软骨细胞基础上,加载一定时间的压力,比较两种软骨细胞Ⅱ型胶原的合成,从细胞外基质成分方面探索压力对不同关节软骨细胞的影响差异,利用关节软骨生物力学特性对治疗骨关节病或错颌畸形等疾病的关节软骨重建或改建的方法进行初步探讨。 方法:通过机械加酶联合消化法,将2周龄的SD雄性大鼠来源的髁突软骨和股关节软骨细胞分离并体外单层培养,建立其分别的有限细胞系,用Ⅱ型胶原的免疫组化来鉴定关节软骨细胞。对两种第三代软骨细胞加载0.01MPa的静压力,实验压力加载时间分为0.5h,3h,12h,以两种细胞分别加载以上不同的压力时间为实验组,对照组的软骨细胞不进行压力的加载,除了加力时间不同外,其余实验条件均相同。用逆转录PCR的方法检测各标本Ⅱ型胶原的表达,统计学分析,用t检验,比较各组数据间的统计学意义。 结果:在0.01MPa静压力下,加力0.5h后,髁突软骨细胞和股关节软骨细胞Ⅱ型胶原表达略有增加,对照组也有少量增加,三者无明显差别;加力3h后,髁突软骨细胞和股关节软骨细胞分别与对照组相比,均有明显Ⅱ型胶原表达的增高,且与对照组比较具有统计学差异,而髁突软骨细胞与股关节软骨细胞之间的表达差异无统计学意义,髁突软骨细胞Ⅱ型胶原比股关节软骨细胞的表达略高;加力12h后,髁突软骨细胞和股关节软骨细胞分别与对照组比较,都有显著地Ⅱ型胶原表达降低(p0.05),且髁突软骨细胞下降趋势高于股关节软骨细胞,但这两者间的比较结果无统计学差异。 结论:一定时间内,Ⅱ型胶原合成可随时间延长而增多,但当加力时间过长后,压力可能抑制Ⅱ型胶原合成,同时可能刺激Ⅱ型胶原的分解代谢;而在相同的机械刺激下,髁突软骨细胞和股关节软骨细胞Ⅱ型胶原变化趋势相似,但髁突软骨细胞变化趋势更明显,结果可能提示我们,关节软骨细胞均可受机械力学刺激调控,而继发性软骨细胞较原发性软骨的Ⅱ型胶原可能更易受压力影响,对压力的反应更敏感。
【图文】：

图 7 髁突软骨细胞生长曲线 图 8 股关节软骨细胞生长曲线2.3 软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色第三代大鼠髁突软骨细胞和股关节软骨细胞的Ⅱ型胶原免疫组化染色后，，呈现：胞浆着棕黄色，呈阳性结果，胞核着较轻的淡蓝色。其余呈阴性结果无染色。（附图 9，10）2.4 各压力组的Ⅱ型胶原表达结果2.4.1 软骨细胞总 RNA 提取结果用紫外分光光度计检测各样品的总 RNA 的浓度和纯度得到如下结果：RNA在波长为 260nm 和 280nm 得到的光密度值之比值（OD260/OD280）在 1.8 以上，电

图 7 髁突软骨细胞生长曲线 图 8 股关节软骨细胞生长曲线2.3 软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色第三代大鼠髁突软骨细胞和股关节软骨细胞的Ⅱ型胶原免疫组化染色后，呈现：胞浆着棕黄色，呈阳性结果，胞核着较轻的淡蓝色。其余呈阴性结果无染色。（附图 9，10）2.4 各压力组的Ⅱ型胶原表达结果2.4.1 软骨细胞总 RNA 提取结果用紫外分光光度计检测各样品的总 RNA 的浓度和纯度得到如下结果：RNA在波长为 260nm 和 280nm 得到的光密度值之比值（OD260/OD280）在 1.8 以上，电
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R783.5

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本文编号：2707556