牙周致病菌的特异检测、治疗及其内毒素刺激人牙周膜细胞差异表达基因的研究

发布时间：2020-06-12 20:58

【摘要】： 牙周膜细胞是牙周组织的主要组成部分，，具有一系列重要的功能，在牙周组织正常代谢和修复再生过程中起重要作用。在牙周致病菌的刺激下，牙周膜细胞生长受到抑制，不能行使正常的功能，因此研究牙周致病菌刺激下牙周膜细胞的基因表达谱对了解牙周致病菌的致病机制、寻找防治措施具有重要意义。本研究利用基因芯片分析牙周致病菌内毒素（LPS）刺激前后人牙周膜细胞的差异基因表达谱，为进一步研究牙周致病菌致病机理、寻找防治方法提供分子水平的依据。利用基因芯片研究表明：中间普氏菌LPS刺激人牙周膜细胞前后共有 14条差异表达基因，其中6条上调基因，8条下调基因。上调基因主要为蛋白激酶和蛋白磷酸酶类基因，而下调基因主要为转录调控基因、凋亡相关基因、受体基因。因此，基因芯片可有效地筛选差异表达基因，从而用于牙周炎病因的研究。为验证基因芯片的分析结果，我们采用原位杂交技术研究中间普氏菌 LPS刺激前后人牙周膜细胞IAP-2的表达，结果表明：体外培养的对照组第 7代人牙周膜细胞，IAP-2表达为阳性；经LPS刺激24h后，人牙周膜细胞 IAP-2表达为阴性，说明LPS可通过抑制牙周膜细胞IAP-2表达，诱导牙周膜细胞的凋亡。原位杂交的结果与基因芯片结果一致。二、目前认为牙周炎是一种有部位特异性的疾病，需要对牙周炎活动性进行快速、准确、客观的诊断和位点特异性的治疗。本研究利用寡核苷酸探针和Periocheck椅旁快速检测技术，观察牙周致病菌在慢性牙周炎位点中的分布，评价两种微生物检测方法在牙周炎活动性监测中的意义。第四军医大学博1：论义 1．利用寡核昔酸探针对慢性牙周炎位点进行检测发现：Pg、Bf、Td在 60 个牙周炎位点中检出率很高，分别为86．67o、85o、96．67O，而Aa检出率为引．67％，说明 Pg、Bf、Td是慢性牙周炎发生、发展中的优势菌群。另外，本研究还发现Pg、Bf、Td两两正相关，表明牙周袋内门能存在Pg、Bf、Td三种微生物的复合体，彼此之间具有协同生长作用。 2．Perioclleck检测的慢性牙周炎位点肽酶水平显著高J‘健康位点，）jk酶水平与牙周临床指标正相关，因此Periocheck检测可用于判断患病位点，有较高的敏感性和特异性，可用于检测牙周炎位点的活动性。 3．Periocheck检测的龈下菌斑肽酶活性和寡核昔酸探针检测的Pg、Bf、 Td细菌数正相关，说明Periocheck椅旁检测的肽酶活性可以间接反映三种牙周公认致病菌的感染。 4．Periocheck检测的龈下菌斑中肽酶活性和 GCFAST、GCFALP水平小相关，说明肽酶活性所代表的 Pg、Bf、Td三种龈下微生物的水平和 GCFAST所代表的牙周组织破坏程度、GCF－ALP代表的早期牙龈炎症具有一定的相关性，进一步说明口腔微生物在牙周病病理中的作用。 5．Periocheck椅旁检测与寡核昔酸探针方法比较：Periocheck椅旁快速检测技术比较简易和快捷，而寡核昔酸＊＊A探针检测比较特异，两种方法均可以用于牙周可疑致病菌的检测，对牙周治疗效果进行评价。二、利用kri。。他ck椅旁快速检测和寡核昔酸探针评估习’周袋内周部使用盐酸二甲胺四环素软膏的治疗效果，观察用药前后临床指标及牙周袋内微生物的改变，并检测GCF．AST、GCFALP水平的变化，结果表明： 1．本研究结果表明牙周洁治和根面平整后，Periocheck转阴（A组）位点各临床指标和实验室指标均有显著改善，疾病具有较好的转归，说明 Periocheck检测可用于评价牙周治疗效果，预测疾病的发展趋势。 3 第四军医大学博l：论文 2．牙周洁治和根面平整后，Periocheck阳性位点只有部分转阴，说明机械性刮治不能完全控制牙周菌斑，对机械性刮治效果不明显的位点需要进行局部化学药物治疗，有选择的抑制牙周袋内的相关致病菌。 3．B组位点在洁治和根面平整后Periocheck检测仍为卜），牙周袋内局部仗用软酸H甲胺四环素软膏（B－2组、B－3组）后，其牙龈指数、菌斑指数、牙周袋深度、附着丧失的改善较再刮治组闪刁组）明显，说明对机械性治疗效果不敏感的位点，局部化学药物可取得较好的临床效果。 4．局部使用盐酸h甲胺四环素（B－2组、B－3组）与对照组（B1组）比较： GCFALP、GCFAST水平均有显著下降，说明盐酸二甲胺四环素软禽可以有效抑制骨吸收，减少牙周组织破坏?
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2001
【分类号】：R781.05

【参考文献】