KGF对口腔黏膜上皮细胞凋亡及增殖的影响

发布时间：2020-06-21 00:47

【摘要】：目的： 多种口腔黏膜病的发病与细胞凋亡密切相关；近来研究发现角质细胞生长因子(Keratinocyte growth factor receptor, KGF)不仅能特异性的促上皮细胞增殖和分化,还抑制上皮细胞的凋亡。在课题组前期对KGF的研究发现在口腔扁平苔藓中KGF、KGFR及KGF mRNA的表达均较正常黏膜低,而KGF蛋白及KGFmRNA在口腔白斑中表达较正常黏膜高,推测KGF与口腔黏膜上皮细胞的增殖和凋亡有密切的联系。 本实验通过观察不同浓度KGF对体外培养的口腔黏膜上皮细胞形态学影响,采用流式细胞仪技术检测上皮细胞凋亡率的改变,并应用荧光实时定量技术检测KGF对上皮细胞凋亡及增殖相关基因表达的影响,探讨KGF对口腔黏膜上皮细胞增殖及凋亡的作用,为进一步探讨研究KGF在口腔黏膜病发生发展中的作用提供依据,为口腔黏膜病的临床治疗提供一定的理论基础。 方法： 1.体外培养人口腔黏膜上皮细胞,取5-10代培养至70～80%融合时分别加入含不同浓度KGF (0ng/ml,5ng/ml,25ng/ml,50ng/ml)的D-KFSM,将其分为对照组(KGF0ng/ml)和实验组(KGF5ng/ml,25ng/ml,50ng/ml),共四组,培养12h、24h、48h后观察人口腔黏膜上皮细胞形态的改变； 2.培养48h后流式细胞仪检测各组上皮细胞的凋亡率； 3.分别培养12h、24h、48h后用荧光实时定量检测各组细胞内凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达； 4.分别培养12h、24h、48h后用荧光实时定量检测各组细胞内增殖相关基因PCNA mRNA的表达： 5.应用统计学方法对细胞凋亡率、Bcl-2、Bax、PCNA mRNA的表达数进行分析,得出结论。 结果： 1.观察细胞形态：相同时间段实验组较对照组上皮细胞贴壁紧,遮光性明显增强,培养48h后,实验3组(KGF50ng/ml)较其他组细胞核仁明显； 2.流式细胞仪检测细胞凋亡率：不同浓度KGF培养48h后,随KGF浓度增加细胞的凋亡率减低(P0.05)； 3.荧光实时定量检测对凋亡的影响结果显示： (1)12h时实验1、2组较对照组上皮细胞内Bcl-2mRNA表达无显著差异,实验3组较对照组Bcl-2mRNA表达逐渐增加,有统计学意义(P0.05)； (2)24h时,各实验组较对照组Bcl-2mRNA表达均显著增加(P0.05),但各实验组间无统计学差异,(P0.05)； (3)48h时各实验组较对照组Bcl-2mRNA表达均显著增加且呈剂量依赖性,(P0.05)； (4)12h时,实验1、2组较对照组Bax mRNA表达无明显差异,(P0.05)；实验3组较对照组Bax mRNA表达明显降低(P0.05)；24h和48h时,实验组较对照组Bax mRNA表达逐渐降低,(P0.05)； 4.荧光实时定量检测对增殖的影响结果显示：各时间段实验组较对照组比PCNA mRNA表达均增加 (1)12h时,各实验组间PCNA mRNA表达逐渐降低,(P0.05) (2)24h时实验组较对照组PCNA mRNA表达增加,(P0.05),但各实验组间无统计学差异,(P0.05)； (3)48h时,实验组较对照组PCNA mRNA表达增加,且呈剂量依赖性,(P0.05)。 结论： 本研究发现外源性KGF能使体外培养的口腔黏膜上皮细胞凋亡率减低；外源性KGF可上调细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA的表达,下调Bax mRNA表达,并同时上调细胞增殖相关基因PCNA mRNA的表达,提示KGF通过调节细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的表达抑制上皮细胞的凋亡,还能通过上调细胞增殖相关基因PCNA mRNA的表达促进上皮细胞的增殖,对上皮细胞有促进增殖和抑制凋亡的双重作用；为进一步探讨研究KGF在口腔黏膜病发生发展中的作用和治疗提供依据。
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R781.5

【参考文献】

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本文编号：2723224