人尿源性干细胞促进移动性牙根吸收修复的体内外研究

发布时间：2020-06-25 07:23

【摘要】：目的:通过体内外实验探讨人尿源性干细胞促进移动性牙根吸收修复的作用。材料方法:体外实验:从6位健康成年男性(年龄:25-27岁之间)尿液中分离人尿源性干细胞(hUSCs),通过流式细胞仪检测细胞表面标志物和多向分化能力检测,鉴定人尿源性干细胞的间充质干细胞特性。将人尿源性干细胞与成牙骨质细胞株OCCM30以1:1的比例间接共培养,进行成骨诱导,于实验7天,进行碱性磷酸酶活性测定和染色。于实验21天,进行茜素红染色。于实验7天,通过RT-PCR和Western blot检测成牙骨质细胞RUNX2,Osterix,OPN,ALP的基因和蛋白表达。于实验1,3,5和7天,CCK-8细胞增殖活性检测成牙骨质细胞株OCCM30的增殖情况。体内实验:选取12只10周龄雄性SD大鼠,对上颌第一磨牙施加100g的力量使其近中移动,建立移动性牙根吸收模型。加力14天后去除矫治力,分为2组,实验组6只(于第一磨牙近中前庭沟和颊腭侧粘膜转折处注射10×10~4个/mL人尿源性干细胞约1mL,每3天注射1次),对照组6只(未注射任何药物),10天后处死大鼠,取下包含第一二磨牙在内的牙槽骨骨块。Micro-CT和HE染色观察牙根吸收修复情况以及牙槽骨骨小梁参数变化,TRAP染色观察破骨细胞数量,免疫组化检测OPN,OCN,CAP和MAB1281的表达。结果:1、流式细胞仪检测显示代表间充质干细胞表面标志物的CD90,CD146和CD105呈阳性。多向分化能力检测发现,人尿源性干细胞能向成骨细胞,成脂肪细胞和成软骨细胞三系分化,说明人尿源性干细胞具有间充质干细胞的特性。2、CCK8检测发现人尿源性干细胞能显著促进成牙骨质细胞的增殖。3、RT-PCR和Western blot检测发现人尿源性干细胞能显著促进成牙骨质细胞RUNX2,Osterix,OPN,ALP基因和蛋白的表达。4、Micro-CT检测发现,实验组牙根吸收陷窝体积显著小于对照组(P0.05)。5、骨小梁参数检测发现骨体积分数(BV/TV)和骨小梁厚度(Tb.Th.)实验组显著高于对照组(P0.05),结构模型指数(SMI),骨小梁分离度(Tb.Sp.)和骨小梁数量(Tb.N.)两组无差别(P0.05)。6、TRAP染色发现实验组内破骨细胞数量少于对照组。7、免疫组化检测发现OPN,OCN和CAP的表达实验组高于对照组,MAB1281在实验组中的表达为阳性。结论:人尿源性干细胞能显著促进成牙骨质细胞的增殖和成骨表达能力,同时促进大鼠移动性牙根吸收的修复。说明人尿源性干细胞具有促进移动性牙根吸收修复的潜力。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R78
【图文】：

形态图,人尿,干细胞,形态

图 1-1 人尿源性干细胞的形态。Figure 1-1 The Morphology of the hUSCs.A：原代 hUSCs，4 天时细胞开始贴壁（标尺：200μm）。B：培养 6 天时，细胞呈“集落状”（标尺：200μm）。C：培养 12 天后，细胞铺满整个孔板，细胞呈长梭形，纤维细胞样形状（标尺：100μm）。D：第 3 代 hUSCs（标尺：100μm）。1.10 人尿源性干细胞（hUSCs）表面标志物流式细胞仪检测结果结果如图 1-2 所示。流式细胞仪检测结果显示代表间充质干细胞表面标志物的CD90，CD105 和 CD146 呈阳性，代表造血干细胞表面标志物的 CD31，CD34 和CD45 呈阴性，说明 hUSCs 具有间充质干细胞的特性，而非造血干细胞。

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图 1-2 人尿源性干细胞表面标志物流式细胞仪检测结果Figure 1-2 The results of the hUSCs surface marker detected by flow cytometer1.11 人尿源性干细胞（hUSCs）成骨诱导分化结果结果如图 1-3 所示。细胞在诱导 21 天后，排列较紧密，部分细胞形态不规则。实验组可以看到红色的钙化结节，对照组未见明显的钙化结节。说明 hUSCs 具有成骨分化能力。

【参考文献】