咽峡炎链球菌通过自噬对口腔鳞癌细胞影响的初步研究

发布时间：2020-07-02 17:33

【摘要】：口腔癌是头颈部常见的恶性肿瘤,其中90%以上是来自黏膜上皮的鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC),在世界常见癌症中排名第六,5年生存率仅60%,预后较差,对患者说话、进食、美观及心理健康造成严重影响。越来越多的研究发现口腔微生物菌群改变与口腔鳞癌的发生发展有着错综复杂的关系,例如鳞癌组织表面链球菌属、卟啉单胞菌属、韦荣菌属、梭杆菌属、放线菌数、嗜血菌属、肠杆菌属、梭菌属的菌量明显增加。咽峡炎链球菌(Streptococcus anginosus,S.anginosus)是口腔、胃肠道和泌尿生殖道的共生菌,我们前期研究发现咽峡炎链球菌在口腔唾液和菌斑的检出率,有报道舌、口底、颊部、牙龈多个部位发生的口腔癌组织样本中,咽峡炎链球菌DNA总的检出率高达88%,在食管癌、胃癌检出率也增高。咽峡炎链球菌是否与口腔癌有相关性需要进一步探索。自噬是一种真核细胞为维持细胞自身稳态进行的一种生理性代谢代偿过程,在癌症、衰老和抗感染性疾病等多方面都起着重要作用,具有十分复杂的生理功能。自噬与肿瘤细胞关系密不可分,在其形成、增殖、转移以及能量代谢等诸多方面发挥及其重要的作?。在生物学上,根据肿瘤细胞基因组成和所处微环境的变化,自噬这把双刃剑既能发挥肿瘤抑制作用,又可帮助肿瘤细胞逃过机体的自然代谢。本课题就咽峡炎链球菌对口腔癌细胞的影响进行了初步研究,并进一步探讨该过程是否存在自噬调控,初步分析此过程自噬与凋亡的关系,以期为口腔癌的病因学和防治提供实验依据,为口腔微生态与疾病关系研究提供补充。目的:探析咽峡炎链球菌是否通过自噬影响人舌鳞癌细胞SCC-15的细胞生物学行为。方法:测定咽峡炎链球菌生长曲线及浓度标准曲线,确定咽峡炎链球菌上清与SCC-15共培养的浓度和时间,设立SCC-15/咽峡炎链球菌组为实验组(SCC-15/S),SCC-15/THB培养基组(SCC-15/T)、SCC-15/S+3-MA为条件对照组,SCC-15/3-MA为阴性对照组,SCC-15无处理组为空白对照组;MDC染色、qRT-PCR、Western blot检测细胞内自噬活性,CCK-8实验检测各组细胞增殖活性,流式检测细胞周期和凋亡,划痕实验检测各组细胞迁移能力,Transwell检测各组细胞侵袭能力。结果:根据咽峡炎链球菌生长曲线和浓度标准曲线结果,取咽峡炎链球菌生长16h上清进行实验,上清与细胞培养基比例1:1,筛选确定共培养时间为16h。(1)MDC染色,PCR,WB的结果均提示SCC-15/S组自噬活性增高,说明咽峡炎链球菌增强了SCC-15细胞的自噬活性;(2)咽峡炎链球菌上清明显抑制了SCC-15细胞的迁移能力(P0.05);(3)流式细胞仪检测,SCC-15/S组细胞周期阻滞在G1期,与对照组相比,S期细胞和G2/M期细胞比例减少(P0.05);细胞凋亡检测表明,SCC-15/S组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01);(4)伤口愈合试验结果显示,S.anginosus显着抑制SCC-15/S组的迁移能力,差异具有显著性(P0.05);(5)与对照组相比,SCC-15/S组细胞侵袭力明显减弱,结果具有显著差异(P0.05)。结论咽峡炎链球菌可以通过自噬降低SCC-15细胞增殖活力、迁移和侵袭能力,抑制细胞生长,促进细胞凋亡。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.8
【图文】：

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重庆医科大学硕士研究生学位论文2 实验结果.1 咽峡炎链球菌生长曲线咽峡炎链球菌生长曲线符合微生物生长的一般规律，需经过 4 个时期，分别 0h-4h 迟缓期，4h-16h 对数期，16h-24h 稳定期，24h 以后为衰亡期。

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咽峡炎链球菌浓度标准曲线

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