白念珠菌感染KB细胞的IL-6mRNA及蛋白表达的实验研究

发布时间：2020-07-08 15:07

【摘要】：目的：通过体外实验观察白念珠菌与KB细胞的黏附情况，探讨白念珠菌对口腔上皮细胞的黏附作用和影响因素，进一步分析白念珠菌的致病机制；应用酶联免疫吸附试验（ELISA）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测白细胞介素-6（IL-6）在KB细胞中的蛋白和mRNA表达以及白念珠菌感染后对其表达的影响，探讨IL-6在口腔上皮细胞早期防御白念珠菌感染中的可能作用。 方法：以口腔鳞癌细胞系KB细胞为研究对象，观察白念珠菌感染KB细胞后，在不同的时间，白念珠菌的黏附总数、活力、及菌丝转换情况；分别以白念珠菌的菌丝相、孢子相和灭活的白念珠菌感染KB细胞，以单独培养的KB细胞作为对照组，分别在6h、12h、24h提取培养上清液，ELISA法检测上清液中IL-6的蛋白含量；RT-PCR法检测白念珠菌感染KB细胞后在24h时IL-6mRNA表达水平。 结果：1.白念珠菌感染KB细胞后发生细胞黏附，24h内，随着时间的推移，被黏附的KB细胞数逐渐增多，孢子相和菌丝相白念珠菌均可黏附KB细胞。2.白念珠菌黏附KB细胞后，念珠菌仍保持其活性，但是随着时间的推移，游离态念珠菌的总数逐渐减少，从感染3小时后的1.5×105candida cells/cm~2减少到24小时后的8×103candida cells/cm~2。3.白念珠菌感染KB细胞后，其形态从孢子相逐渐向菌丝相进行转换。并且随着时间的推移，菌丝的转换率逐渐升高，由3小时后的23.1%升高到24小时后的82.2%。差异有统计学意义（P0.05）。4.白念珠菌感染KB细胞后表达IL-6的蛋白含量随时间的增加而增加，12h达到高峰，随后出现下降趋势，白念珠菌孢子相和菌丝相感染KB细胞后IL-6的蛋白表达含量与对照组比较，P0.05，差异有统计学意义。5. RT-PCR成像分析系统显示，孢子相和菌丝相白念珠菌黏附KB细胞后均可使IL-6mRNA的表达增加而且显著高于对照组，P0.05，差异有统计学意义。 结论：1.白念珠菌感染KB细胞后，被黏附的KB细胞数与游离态白念珠菌的总数均具有时间依赖性。白念珠菌的菌丝转换率与时间呈正相关。2.白念珠菌感染KB细胞后IL-6的蛋白表达上调，且表达的含量与时间具有依赖关系。3.白念珠菌感染KB细胞后IL-6的mRNA表达上调，提示上皮细胞可能参与白念珠菌的免疫反应。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R780.2
【图文】：

取5μl PCR产物与1μl上样液，混匀后加入2%琼脂糖凝胶加样孔中，以DL1000作为相对分子质量Marker，电压为80 v，电泳约40分钟，取出凝胶置于凝胶成像分析仪中成像，用Gel-Pro analyze做条带灰度分析，以IL-6mRNA与GAPDH mRNA条带灰度比值来检测样本中IL-6mRNA的相对表达量。（六）结果统计分析所得数据用 ±S 表示，经 SPSS11.5 软件进行统计学处理。采用单因素方差分析，P<0.05，差异有统计学意义。结 果一.白念珠菌与 KB 细胞的黏附（一）白念珠菌黏附 KB 细胞的显微镜下观察正常的 KB 细胞是扁平的多角形，在胞质靠近中央处有圆形的细胞核，各个细胞间紧密相连，彼此互相衔接，呈现“铺路石”状。4. PCR产物半定量分析

取5μl PCR产物与1μl上样液，混匀后加入2%琼脂糖凝胶加样孔中，以DL1000作为相对分子质量Marker，电压为80 v，电泳约40分钟，取出凝胶置于凝胶成像分析仪中成像，用Gel-Pro analyze做条带灰度分析，以IL-6mRNA与GAPDH mRNA条带灰度比值来检测样本中IL-6mRNA的相对表达量。（六）结果统计分析所得数据用 ±S 表示，经 SPSS11.5 软件进行统计学处理。采用单因素方差分析，P<0.05，差异有统计学意义。结 果一.白念珠菌与 KB 细胞的黏附（一）白念珠菌黏附 KB 细胞的显微镜下观察正常的 KB 细胞是扁平的多角形，在胞质靠近中央处有圆形的细胞核，各个细胞间紧密相连，彼此互相衔接，呈现“铺路石”状。4. PCR产物半定量分析

一.白念珠菌与 KB 细胞的黏附（一）白念珠菌黏附 KB 细胞的显微镜下观察正常的 KB 细胞是扁平的多角形，在胞质靠近中央处有圆形的细胞核，各个细胞间紧密相连，彼此互相衔接，呈现“铺路石”状。图 1 正常贴壁生长的 KB 细胞 图 2 孢子相白念珠菌黏附 KB 细胞（倒置显微镜 40×） （革兰氏染色 100×）

【参考文献】

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本文编号：2746697