沙利霉素影响舌鳞癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的初步研究

发布时间：2020-07-21 19:16

【摘要】：目的:癌细胞转移在舌癌的发展过程中起着至关重要的作用。近年来,沙利霉素因其具有抑制多种肿瘤细胞生长和转移、诱导肿瘤细胞凋亡、抵抗肿瘤细胞产生多药耐药性等作用受到了研究者们的广泛关注。然而,沙利霉素对舌鳞癌细胞迁移和侵袭特性的影响尚不清楚。本文旨在研究沙利霉素对人口腔舌鳞癌CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响,并初步探索其作用机制。方法:沙利霉素和顺铂分别作用于CAL-27细胞和EA.hy926细胞,CCK-8法分别检测两药对两种细胞增殖的影响;细胞划痕实验和Transwell小室法检测沙利霉素对CAL-27细胞迁移和侵袭能力的影响;RT-PCR技术检测沙利霉素作用后CAL-27细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)在mRNA水平的表达变化;Western免疫印迹检测沙利霉素对CAL-27细胞中E-cadherin、Vimentin以及β-连环蛋白(β-catenin)表达的影响。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果:沙利霉素和顺铂在相同程度地抑制EA.hy926细胞生长的同时、均呈时间与剂量相关地抑制了CAL-27细胞的增殖,且沙利霉素增殖抑制作用强于顺铂(P0.05);沙利霉素降低划痕愈合的速度;经过沙利霉素(4μmol/L)处理过的CAL-27细胞,其迁移和侵袭能力均明显低于空白对照组(P0.05);沙利霉素增加E-cadherin基因的表达,降低Vimentin基因的表达;沙利霉素上调了CAL-27细胞中E-cadherin蛋白的表达水平,并且下调了Vimentin和β-catenin蛋白的表达水平。结论:沙利霉素能够明显抑制CAL-27细胞的增殖能力,同时还显著地减弱了CAL-27细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与抑制癌细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)有关。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.8
【图文】：

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图 1 经沙利霉素或顺铂作用后，CAL-27 细胞和 EA.hy926 细胞存活率（ x±s, n=6 ）Figure 1 Cell viability of CAL-27 cells and EA.hy926 cells after exposure to salinomycin orcisplatin（ x±s, n=6 ）3 讨论由于本实验中沙利霉素母液是用 DMSO 配制的，为了避免 DMSO 对细胞毒性作用影响实验结果，所以设计了 DMSO 对照组，首先证明了本实验中采用的最大剂量沙利霉素所对应的 DMSO 含量对 CAL-27 细胞生长的影响可以忽略不计。沙利霉素已经显示出对许多不同种类癌细胞的增殖过程有很强的抑制作用，包括多药耐药癌细胞，以及多种癌细胞，即白血病细胞，结肠癌细胞，前列腺癌细胞和许多其他癌细胞。 Kaplan 等［32］用不同浓度的沙利霉素处理人卵巢癌细胞（OVCAR-3）和永生化人卵巢上皮细胞（IHOEC），发现 0.1 μmol/L 的沙利霉素

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重庆医科大学硕士研究生学位论文2.1 沙利霉素对划痕愈合速度的影响在实验开始时，实验组各组与对照组划痕宽度基本一致。经沙利霉素作用 24 h后发现，对照组划痕宽度明显减小。与对照组比，实验组各组划痕闭合速度均有减慢，提示沙利霉素对 CAL-27 细胞迁移有抑制作用。并且，从图中可以看出，沙利霉素浓度越高，24 h 时划痕宽度越明显（图 2）。

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重庆医科大学硕士研究生学位论文因素方差分析。P<0.05 为差异有统计学意义。2 结果2.1 沙利霉素影响 EMT 相关基因的表达浓度为 2、4、8 μmol/L 的沙利霉素分别作用于 CAL-27 细胞 24 h 后, 研究结果显示，细胞中 Vimentin 在 mRNA 水平的表达降低，E-cadherin 在 mRNA 水平的表达增加(P<0.05，图 4)。

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