组蛋白去乙酰化酶抑制剂调节脂多糖刺激下单个核细胞炎症因子表达和牙龈干细胞成骨分化

发布时间：2020-07-22 10:01

【摘要】：目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDAC inhibitors,HDACi)对脂多糖刺激下人外周血单个核细胞炎症因子表达和牙龈干细胞(gingival stem cells,GMSCs)成骨分化的影响及其相关分子调控机制,以期为牙周炎治疗提供新的线索和思路。方法:1.组蛋白去乙酰化酶抑制剂抑制脂多糖刺激下人外周血单个核细胞炎症因子的表达取正常人外周血(肝素抗凝),采用葡聚糖-泛影葡胺密度剃度离心法分离人外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),并进行培养。处理组加入脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激4小时后分别加入伏立诺他(Vorinostat,SAHA),曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)和帕比司他(Panobinostat,LBH589),1小时后收取上清液,用流式细胞术检测炎症因子的表达。2.组蛋白去乙酰化酶抑制剂调节脂多糖刺激下牙龈干细胞的成骨分化及其作用机制收集健康的牙龈组织,用酶消化法分离牙龈干细胞进行培养,选取生长状态良好的第三代牙龈干细胞按照分组分别加入脂多糖及SAHA,TSA,LBH589后进行成骨诱导,诱导5天、7天后进行碱性磷酸酶染色和活性检测,14天后进行茜素红染色及钙结节定量分析。采用RT-PCR检测成骨7天后组蛋白去乙酰化酶的表达及不同处理组成骨相关分子OCN、RUNX2、Osx的表达。按照分组在牙龈干细胞中加入LPS,TSA,SAHA或LBH589,5分钟和15分钟后收取蛋白进行Western-blot实验检测p65和β-catenin蛋白的表达。结果:LPS刺激后人外周血单个核细胞炎症因子IFN-γ,IL-6和TNF-ɑ的表达显著增加,而加入TSA,SAHA和LBH589后炎症因子的表达水平明显降低。牙龈干细胞成骨诱导分化期间加入LPS可增加部分组蛋白去乙酰化酶的表达。牙龈干细胞成骨分化实验表明,HDAC抑制剂(TSA,SAHA和LBH589)组较LPS组ALP染色和茜素红染色增强,ALP表达明显上调,钙离子浓度显著提高,并且成骨相关分子OCN、RUNX2、Osx的表达水平上升。Western blot结果显示与LPS组相比,HDAC抑制剂组p65 Ser536位点磷酸化水平下降,p65 K310位点的乙酰化水平显著上调。此外,LPS组GMSCs中β-catenin的表达水平下降,加入TSA,SAHA和LBH58后可上调β-catenin的表达。结论:HDAC抑制剂(TSA,SAHA和LBH589)可以抑制脂多糖刺激下PBMCs促炎因子的产生,挽救脂多糖刺激下牙龈干细胞成骨分化潜能的降低。其调节炎症环境下牙龈干细胞的成骨分化可能与NF-κB信号通路和Wnt信号通路有关。提示HDAC抑制剂(TSA,SAHA和LBH589)在牙周炎和种植体周围炎等疾病的治疗中可能具有应用价值。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R781.42

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本文编号：2765667