凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax在实验性Ⅱ糖尿病大鼠种植体周围的表达及意义

发布时间：2020-07-22 12:59

【摘要】： 目的：应用大鼠糖尿病(diabetes mellitus,DM)模型,观察实验性Ⅱ糖尿病大鼠种植体周围骨细胞凋亡调控基因Bcl-2和Bax蛋白表达水平,初步探讨细胞凋亡在糖尿病种植体骨愈合过程中的作用。 方法：选择2月大SD健康雄性大鼠40只,体重170-230g,随机分为正常组对照、正常种植组、糖尿病模型组。DM模型组按55mg/kg腹腔内一次性注射枸橼酸钠链脲佐菌素溶液建立Ⅱ型DM模型,血糖值高于16.7 mmol/L视为建模成功,否则予以剔除。将建模成功的大鼠随机分为糖尿病组和糖尿病种植组。室温下标准饲料喂养2两周后建立正常种植模型和糖尿病种植模型,随机选取一侧胫骨近骺端处植入微型种植体支抗。于8周后处死动物,采用不带种植体脱钙标本硬组织切片、脱钙标本切片常规HE染色,以正常组为对照,用免疫组织化学方法,对糖尿病大鼠种植体周围Bcl-2和Bax凋亡蛋白因子的表达进行观察对比。用TUNEL法检测凋亡细胞。 结果：(1)实验动物观察：糖尿病模型组大鼠明显出现消瘦,多饮多食多尿现象,死亡两只。正常对照组及正常种植组大鼠均健康存活,无感染或者是意外死亡。所有植入的种植钉均稳固,没有松动脱落。植入部位伤口愈合良好。 (2)骨密度测量：剔胫骨表面的软组织,以Lunar Prodigy双能X线骨密度仪测定右侧胫骨种植体的骨矿物密度。用小动物分析软件进行分析可见,模型组骨密度明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05)。 (3) HE染色观察：种植组：种植钉周围炎症反应,细胞核明显增多,大量的中性粒细胞浸润,可见大量的骨巨细胞及炎性的肉芽组着,种植钉与骨界面周围破骨细胞活跃,出现局部的骨组织吸收。糖尿病种植组：细胞核明显增多,松质骨区种植体表面包绕的骨板较薄,且有较多的区域与骨髓腔直接接触；周围骨小梁稀疏,变细；骨髓腔内可见大量的脂肪细胞。 (4) TUNEL检测：棕色细胞核为阳性凋亡细胞,没显色的细胞为阴性细胞。正常组由于正常骨代谢,骨组织不断进行改建、可检测到凋亡细胞。但是凋亡细胞在骨基质中散在分布,数量较少。糖尿病组由于出现骨质疏松,骨形成与骨吸收平衡失调,骨形成下降,骨形成障碍。因此检测到的凋亡细胞比对照组有所增多,与对照组比较差异有统计学意义。正常种植组植入种植体8周后在种植体周围检测到凋亡细胞,凋亡细胞比正常组略有增多,与正常组比较差异有统计学意义。糖尿病种植组凋亡细胞明显增多,与其它各组比较差异均有统计学意义 (5) bcl-2和bax凋亡蛋白因子标记结果显示：四个组均表达bcl-2和bax,糖尿病种植组bax表达明显增高,bcl表达下降,与其它各组比较差异均有明显的统计学意义。 (6)骨细胞凋亡率与bcl-2／ba×比值的相关性分析：骨细胞凋亡率与bcl-2／bax比值用pearson相关分析,二者呈负相关(p＜0.001),相关系数为-0.832。 结论： 1.糖尿病大鼠种植体周围骨细胞凋亡率增加,提示细胞凋亡与糖尿病状态下种植体骨整合降低有关。 2. Bcl-2／bax下调,提示bcl-2和bax共同参与糖尿病种植体周围细胞的凋亡,为糖尿病种植体愈合的研究提供进一步的理论基础。
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R783.6
【图文】：

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山西医科大学硕士学位论文粉一汗洪一正常对照组(图2一 1)400、正常种植组(图2一)400x糖尿病组(图2一 3)400x糖尿病种植组(图2礴)400x图2一1、2一2、2一3、24为各组骨细胞在400倍镜光下TUNEL法检测骨细胞凋亡。凋亡细胞呈棕色染，定位于细胞核。图2一1为正常组，凋亡细胞非常少，每个光镜下仅有2一3个，分布散在，没有规律性。图2一为种植组，凋亡细胞有所增多。图2一为糖尿病组，可见有大量的凋亡细胞。图2一为糖尿病种植组，与前三组比较，凋亡细胞明显的增多。

山西医科大学硕士学位论文正常对照组(图3一 1)400、正常种植组(图3一 2)400x精尿病组(图3一 3)400x箱尿病种植组(图34)400x图3一1、3一、3一3、34为各组骨细胞bel-2在40()倍光镜下免疫组化染色，呈棕褐色染色，主要定位于胞桨。图3一1为正常对照组，bel-2在细胞桨中表达，阳性表达比较少。图3一为正常种植组，bel-2表达有所减少。图3一3为糖尿病组，bel一表达明显减少，染色加深。图34为糖尿病种植组，与前三组比较，bel-2表达不仅明显减少

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本文编号：2765851