涎腺多形性腺瘤来源的肿瘤相关成纤维细胞生物学特性研究

发布时间：2020-07-22 16:16

【摘要】：目的：涎腺多形性腺瘤（Pleomorphic adenoma, PA）是口腔颌面部常见良性肿瘤。占涎腺上皮性肿瘤的51%，占良性肿瘤的88%。女性略多于男性。可发生于任何年龄，以30-60岁最多见。好发于腮腺和颌下腺，其中80%-90%发生于腮腺，约3%-4%可发生癌变并发生转移，甚至导致死亡。该瘤虽为良性，但包膜常被瘤细胞侵袭或包膜结构不完整，是介于良恶性之间的肿瘤，因此依其生物学特性分类，也可将其归类为临界瘤。该瘤膨胀性生长影响容貌，且手术后易复发，5年后的复发率为3.4%，多次复发有恶变可能，复发次数越多，其恶变的可能性将越高。本研究目的为检测PA组织中是否存在肿瘤相关成纤维细胞（Tumorassociated fibroblasts, TAFs），进而研究PA来源TAFs的生物学特性，并与涎腺腺样囊性癌（Adenoid cystic carcinoma, ACC）来源的TAFs相比较。材料和方法：病例组选择大连医科大学附属第一医院口腔科住院接受手术治疗的PA患者66例，其中男性26例，女性40例，均经组织病理学确诊。对照组为同时期同一地区无血缘关系个体的正常涎腺，共18例。对实验组和对照组进行组织固定、包埋、切片等处理后，采用免疫组织化学染色检测波形蛋白（Vimentin，VIM），平滑肌肌动蛋白(α-Smooth muscle actin, α-SMA)，基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinases-2, MMP-2)在66例PA及18例对照组中的表达。使用Image pro-plus6.0(IPP6.0)、SPSS16.0软件进行蛋白定量及统计学分析，以p＜0.05为有统计学差异。用于细胞实验的PA、ACC组织取自大连医科大学附属第一医院口腔科，均经组织病理学确诊。在无菌条件下进行原代细胞提取，置于CO2细胞培养箱中培养，免疫荧光染色进行细胞鉴定，待细胞铺满瓶底面积的70-80%时，取细胞进行迁移试验，在倒置荧光显微镜下观察并拍照，以计算细胞迁移面积的大小判断其迁移速度。结果：VIM在实验组和对照组中表达无统计学差异（p＞0.05），α-SMA在PA间质中表达高于对照组（p＜0.001），MMP-2在PA间质中表达高于对照组（p＜0.001）。TAFs迁移实验证明PA来源的TAFs较ACC来源的TAFs迁移速度慢，并且MMP-2在ACC间质中表达高于PA组（p＜0.05）。结论：1. TAFs存在于PA组织中。2. PA来源的TAFs比ACC来源的TAFs迁移能力弱。3. MMP-2在正常涎腺、PA及ACC间质中的表达量呈递增关系。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R739.8
【图文】：

细胞迁移

图 1 细胞迁移装置示意图a, 载玻片; b, PDMS验步骤：待细胞铺满瓶底面积的 70-80%时，倒掉，胰酶消化使细胞悬浮，用培养液混匀细胞，移液接种于 PDMS 的两个小孔内。待细胞贴壁后，揭去。集及分析用 Olmpus 显微镜，物镜选择高倍镜，启动显微图位置，使每张切片都使用同一电压，调节白平衡，对每张组织切片进行十个视野的随机拍摄。用 Image pro-plus6.0（IPP6.0）软件，打开已拍摄好域的不同（阳性标准：棕黄色颗粒，特异性分布于色，选择 HIS 界面,将 H 选择在 0-30 的阈值内，这分析中，我们均使用十个视野的平均值进行计算。

涎腺,肌上皮细胞,成网状,梭形

正常涎腺及PA的HE染色（A）正常涎腺；（B）PA，肌上皮细胞和腺上皮细胞排列成导管样结构；（C）PA，肌上皮细胞排列成团片样；（D）PA，黏液样组织.Scalebar=50μm

涎腺,间质,肌上皮细胞,成纤维细胞

图 2 正常涎腺及 PA的 HE 染色（A）正常涎腺；（B）PA，肌上皮细胞和腺上皮细胞排列成导管样结构；（C）PA，肌上皮细胞排列成团片样；（D）PA，黏液样组织. Scale bar = 50 μm2 免疫组织化学染色结果VIM 可以标记间质及间质来源的细胞，正常成纤维细胞及 TAFs 都表达VIM，因此可以通过 VIM 的表达观察正常涎腺组织及 PA 中间质的分布。结果显示 VIM 在正常组织的间质成纤维细胞呈阳性表达（如图 3A）。PA间质中和包膜中的成纤维细胞内也可见到强阳性表达（如图 3B）。经统计学分析，两者无显著性差异（p ＞ 0.05）。同时，VIM 在对照组和 PA 组实质部分的肌上皮细胞也呈阳性表达，常可见到连成一片的棕黄色颗粒。

【参考文献】