miR-320c对人牙髓干细胞增殖及分化的影响

发布时间：2020-07-23 04:28

【摘要】：目的本课题旨在研究mi R-320c对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,h DPSCs)成骨、成脂能力以及增殖的影响,并分析对于成骨、成脂分化相关基因的影响,为h DPSCs在再生医学中的应用提供理论基础。方法1使用酶消化组织块法培养原代牙髓组织来源细胞,并使用流式细胞仪鉴定。2 mi R-320c mimic及其阴性对照NC(mi R-NC组)分别瞬时转染h DPSCs,24h后采用细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测两组细胞增殖能力;RT-q PCR验证mi R-320c在h DPSCs中的表达水平,分别检测两组成骨分化相关基因OCN及Runx2 m RNA表达水平,成脂分化相关基因PPAR-γm RNA的基因表达水平;茜素红染色分别检测两组成骨分化能力;油红O染色分别检测两组成脂分化能力。3 mi R-320c inhibitor及其阴性对照NC(mi R-INNC组)分别瞬时转染h DPSCs,24h后采用CCK-8法分别检测两组细胞增殖能力;RT-q PCR验证mi R-320c在h DPSCs中的表达水平,分别检测两组成骨分化相关基因OCN及Runx2 m RNA表达水平,成脂分化相关基因PPAR-γm RNA的基因表达水平;茜素红染色检测两组成骨分化的能力;油红O染色检测两组成脂分化的能力。结果1通过流式细胞术鉴定经酶消化组织块法培养的细胞为CD34-,CD44+,Strol-1+,符合间充质干细胞表面抗原特征,即所得细胞为h DPSCs。2成功在h DPSCs内过表达或敲低mi R-320c(P0.01)。3与mi R-NC组相比,过表达mi R-320c的h DPSCs增殖活性显著降低(P0.01);与mi R-INNC组相比,敲低mi R-320c的h DPSCs增殖活性显著升高(P0.01)。结果表明mi R-320c负向调控h DPSCs的增殖能力。4茜素红染色结果显示,与mi R-NC组相比,过表达mi R-320c的h DPSCs钙结节形成明显减少(P0.05);RT-q PCR结果显示成骨分化相关基因OCN及Runx2的m RNA表达水平均有显著下降趋势(P0.01)。相反,与mi R-INNC组相比,敲低mi R-320c的h DPSCs钙结节形成明显增多(P0.01);RT-q PCR结果显示成骨分化相关基因OCN及Runx2 m RNAs表达水平均有显著上升趋势(P0.01)。以上结果表明,mi R-320c负向调控h DPSCs中成骨分化相关基因OCN及Runx2的表达及细胞的成骨分化能力。5油红O染色结果显示,与mi R-NC组相比,过表达mi R-320c的h DPSCs成脂能力增强;RT-q PCR结果显示成脂分化相关基因PPAR-γ的m RNA表达水平均有显著上升趋势(P0.01)。与mi R-INNC组相比,敲低mi R-320c的h DPSCs脂滴形成减少;RT-q PCR结果显示成脂分化相关基因PPAR-γ的m RNA表达水平均有显著下降趋势(P0.01)。以上结果表明,mi R-320c正向调控h DPSCs中成脂分化相关基因PPAR-γ表达及细胞的成脂分化能力。结论1应用酶消化组织块法从人牙髓组织中分离培养的细胞为h DPSCs。2 mi R-320c可负向调控h DPSCs增殖能力。3 mi R-320c可能通过负向调控成骨分化基因OCN及Runx2 m RNAs的水平,负向调控h DPSCs成骨分化能力。4 mi R-320c可能通过正向调控成脂分化基因PPAR-γm RNA的水平,正向调控h DPSCs成脂分化能力。
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R78

【参考文献】

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本文编号：2766847