新型抗菌剂DAPC对变形链球菌和牙龈卟啉单胞菌的作用研究

发布时间：2020-08-03 11:19

【摘要】：[目的]1.测定DAPC对变形链球菌和牙龈卟啉单胞菌的MIC和MBC,评价DAPC对两种细菌的抗菌活性;2.探讨DAPC对变形链球菌和牙龈卟啉单胞菌毒力基因表达的影响;3.比较DAPC对变形链球菌和牙龈卟琳单胞菌粘附的作用,探讨DAPC对釉质表面的粘附性。[方法]1.采用液体二倍稀释法分别测定DAPC和葡萄糖酸氯己定对变形链球菌和牙龈卟啉单胞菌的MIC和MBC;2.以葡萄糖酸氯己定为阳性对照,变形链球菌以TPY液体培养基为阴性对照,牙龈卟啉单胞菌以BHI肉汤培养基为阴性对照,分别在MIC和MBC浓度下,通过Real-time qPCR检测药物作用后变形链球菌gtfB、gtfC基因,牙龈卟啉单胞菌rgpA基因的表达量;3.以葡萄糖酸氯己定为阳性对照,PBS为阴性对照,在浸泡过药物后的釉质片表面培养细菌,通过结晶紫法测定变形链球菌和牙龈卟啉单胞菌在釉质表面形成的生物膜量。[结果]1.DAPC对变形链球菌的MIC为31.251μg/ml,MBC为62.5μg/ml,葡萄糖酸氯己定对变形链球菌的MIC为15.625μg/ml,MBC为31.25μg/ml;DAPC对牙龈卟啉单胞菌的MIC为3.90625μg/ml,MBC为3.90625μg/ml,葡萄糖酸氯己定对牙龈卟琳单胞菌的MIC为1.95312μg/ml,MBC为3.90625μg/ml。2.DAPC浓度为MIC和MBC时,变形链球菌gtfB、gtfC基因的表达显著低于TPY组(P0.01),但与葡萄糖酸氯己定MBC组没有差异(P0.05);DAPC浓度为1/2MBC和MBC时,牙龈卟啉单胞菌rgpA基因的表达显著低于阴性对照组(P0.01),且DAPC浓度为1/2MBC和MBC时的抑制作用与葡萄糖酸氯己定的MIC组和MBC组没有差异(P0.05)。3.DAPC和葡萄糖酸氯己定的浸泡浓度为MIC时,两者对变形链球菌和牙龈卟啉单胞菌的粘附均无抑制作用(P0.05)。(1)对于变形链球菌,DAPC浸泡浓度为250μg/ml时,生物膜的形成量显著低于TPY组(P0.01),24h内变形链球菌生物膜量高于浸泡浓度为125μg/ml的葡萄糖酸氯己定组(P0.01),而培养48h小时之后两组没有差异(P0.05);DAPC浸泡浓度为2400μg/ml时,变形链球菌生物膜显著低于TPY组(P0.01),24h内弱于浓度为1200μg/ml的葡萄糖酸氯己定组(P.01),之后与葡萄糖酸氯己定没有差异(P0.05)。(2)经过本实验各个浓度DAPC的浸泡后,24h内釉质片表面的牙龈卟啉单胞菌的生物膜量与BHI组均无差异(P0.05)。DAPC浸泡浓度为62.5μg/ml的组在培养48h后牙龈卟啉单胞菌的生物膜量显著低于BHI组(P0.01),且与葡萄糖酸氯己定浸泡浓度为31.25μg/ml的组没有差异(P0.05),在培养72 h后生物膜量已经显著低葡萄糖酸氯己定(P0.05);DAPC浸泡浓度为2400μg/ml时,48h后牙龈卟啉单胞菌的生物膜量显著低于BHI组(P0.01),且生物膜量在48h和72h与葡萄糖酸氯己定浸泡浓度为1200μg/ml的组没有差异(P0.05)。[结论]1、DAPC对变形链球菌和牙龈卟啉单胞菌均具有较好的抗菌活性。2、DAPC的MIC和MBC浓度均可显著抑制变形链球菌gtfB、gtfC基因和牙龈卟啉单胞菌rgpA基因的表达。3、250μg/ml及以上浓度的DAPC可有效抑制变形链球菌的粘附,62.5μg/ml及以上浓度的DAPC在481h后能有效抑制牙龈卟啉单胞菌的粘附。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R781
【图文】：

牙龈卟啉单胞菌,验证结果,特异性,内参

啉单胞菌目的基因特异性验证结果（从左到右依次为：基因）逡逑因和内参的ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ｑＰＣＲ定量结果逡逑菌相应的目的基因以及内参的ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ｑＰＣＲ扩示，扩增曲线呈Ｓ形，各个期分段明显，扩增曲溶解曲线可见单峰，峰尖而窄，说明扩增时反应

变形链球菌,验证结果,特异性,卟琳

１．变形链球菌和牙龈卟琳单胞菌目的基因特异性验证。逡逑实验结果显示，变形链球菌和牙龈卟啉单胞菌各目的基因引物均能引出唯一逡逑特异的单一条带，如图１，２所示。逡逑１９逡逑

扩增曲线,变形链球菌,内参

２？目的基因和内参的ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ｑＰＣＲ定量结果逡逑两种细菌相应的目的基因以及内参的ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ邋ｑＰＣＲ扩增曲线和溶解曲线如逡逑图３－１２所示，扩增曲线呈Ｓ形，各个期分段明显，扩增曲线平滑连续，无明显逡逑转折拐角。溶解曲线可见单峰，峰尖而窄，说明扩增时反应特异性良好。逡逑２０逡逑

【参考文献】