内源性甲状旁腺激素在小鼠牙周炎骨吸收及颌骨缺损愈合中的作用研究

发布时间：2020-08-04 15:03

【摘要】：甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)由甲状旁腺主细胞合成分泌,调节钙磷代谢、维持机体钙平衡的主要激素之一。近年来的研究发现,甲状旁腺激素在局部骨组织改建、再生等一系列过程中发挥了关键性的重要作用[1-3],对于骨骼具有促进骨形成和增加骨吸收的双向作用[4-6]。临床上,重组人甲状旁腺激素(1-34)[rhPTH(1-34)] -特立帕肽( Teriparatide Forteo,TPTD)于2002年经美国FDA批准用于治疗绝经后妇女骨质疏松症和原发性骨质疏松症[7],其提高骨量、改善骨质的作用已经被大量的动物实验和临床研究所证实。本研究拟在PTH基因敲除小鼠的基础上,建立牙周病牙槽骨吸收及颌骨缺损的动物模型,研究内源性PTH对牙周病牙槽骨吸收及颌骨缺损愈合过程的影响,为PTH用于预防和治疗牙周病牙槽骨吸收、促进牙槽骨及颌骨的再生修复提供理论和实验依据。第一部分内源性PTH在实验性小鼠牙周炎骨吸收中的作用目的:探讨内源性甲状旁腺素在实验性小鼠牙周炎骨吸收过程中的作用。方法:取PTH基因敲除小鼠和野生型小鼠各20只,大肠杆菌内毒素脂多糖牙龈局部注射法建立小鼠实验性牙周炎牙槽骨吸收模型,通过组织形态学、骨总胶原染色、耐酒石酸酸性磷酸酶染色等方法,比较分析甲状旁腺激素基因敲除小鼠和野生型小鼠牙槽骨吸收程度的差异。结果:与野生型小鼠相比,PTH基因敲除小鼠的牙周骨丧失值(PBL)、牙槽骨单位面积破骨细胞数(N.Oc/B.Pm)以及破骨细胞的总面积占牙槽骨总面积的百分比(Oc.S/B.S)则明显增加,牙周单位面积骨量(BV/TV)%明显降低。结论:内源性PTH对正常情况下小鼠牙槽骨的发生发育并无明显影响,但对实验性牙周炎牙槽骨吸收有明显的抑制作用。第二部分内源性PTH在实验性小鼠颌骨缺损愈合中的作用目的:探讨内源性PTH在实验性小鼠颌骨缺损愈合过程中的作用。方法:取PTH基因敲除小鼠和正常基因型小鼠各30只,在左侧下颌骨建立骨缺损模型,分别于术后5、7、10、14、21天处死小鼠并取下颌骨,通过影像学、组织形态学等方法,比较PTH基因敲除小鼠和野生型小鼠颌骨缺损愈合的差异。结果:相同时间点,PTH基因敲除小鼠下颌骨缺损区的X线平均灰度值明显低于野生型小鼠组;组织学观察,PTH基因敲除小鼠下颌骨缺损区纤维性骨痂和骨性骨痂形成时间均迟于野生型小鼠。结论:内源性PTH对小鼠实验性下颌骨缺损的愈合有明显的促进作用。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：R781.4
【图文】：

基因型鉴定,小鼠

南京医科大学硕士学位论文11) PCR 反应产物电泳配制 2%琼脂糖凝胶：称取 0.5g 琼脂糖，加入 50ml 的 TAE 缓冲液中，混匀，放入微波炉中加热 5～7min，直至琼脂糖完全融解，取出置通风橱中，冷却至 65℃，加入 2μl 溴乙锭(EB)液，混匀，倒入预先准备好的电泳槽中，立即插入梳子。待其完全冷却时，拔出梳子，调整好凝胶方向并将凝胶置于 TAE 电泳缓冲液中。将 PCR 产物从水浴锅中取出，向 PCR 管中加入 6×上样缓冲液 5μl，混匀、离心后，取 12μl 加入已经预制好的 2%琼脂糖凝胶的上样孔中，120V 电泳 10分钟。将电泳后的凝胶拍照、存档、记录基因型(图 1)。

龈沟,小鼠,试剂,进针

3.2.2 用微量注射器（0-25μl）于小鼠左上颌第一磨牙颊、腭侧龈沟处进针，进针深度约2mm，各注入2μl 浓度为5μg /μl 的内毒素（lipopolysaccharide ,LPS）（Sigma公司，美国）。（图2）图2 左图为LPS试剂，右图为在小鼠龈沟内注射LPS。图3 小鼠牙槽骨标本的数码照。16

牙槽骨,小鼠,标本,龈沟

小鼠牙槽骨标本的数码照

【参考文献】