富血小板纤维蛋白提取液对成骨细胞影响的实验研究

发布时间：2020-08-05 07:55

【摘要】：[目的] 本课题通过体外实验研究富血小板纤维蛋白提取液(Platelet-rich fibrin extract, PRFe)对成骨细胞增殖、分化、成骨及细胞骨架的影响,探讨富血小板纤维蛋白对成骨细胞的作用,以期为富血小板纤维蛋白在临床的应用提供理论基础。 [方法] 1、PRFe制备：健康雄性SD大鼠,腹主动脉取血10ml,离心后制取富血小板纤维蛋白(PRF),冷冻后再次离心制取PRFeo 2、钛片制备：将直径为10mm、厚度为lmm的TA2纯钛钛片进行酸蚀喷砂(SLA)处理。 3、分组：实验分为实验组(P组)和对照组(D)组,P组使用含PRFe的α-MEM培养液(10%FBS)培养细胞,D组则使用不含PRFe的α-MEM培养液(10%FBS)。 4、观察指标：(1)甲基噻唑基四唑(MTT)法测定1d,3d,5d的细胞增殖数；(2)碱性磷酸酶(ALP)活性检测1d,3d,5d,7d的细胞分泌碱性磷酸酶活性情况；(3)茜素红染色观察14d,21d细胞分泌钙结节的情况；(4)激光共聚焦显微镜观察培养后3h、6h、9h、12h的细胞骨架形态；(5)荧光实时定量PCR测定CbfalmRNA和OCN mRNA基因分别在3d、7d的表达；(6)扫描电子显微镜观察细胞接种于喷砂酸蚀钛片后1d、3d、5d的细胞伸展状况。 [结果] 1、MTT检测细胞增殖：随培养时间延长,细胞数量逐渐增加,在各时间点,P组细胞的吸光度值均明显高于D组,差异有统计学意义(P0.05)。 2、ALP活性检测：随着培养时间延长而增加,P组的增加更为显著,在各时间点,P组的吸光度值均显著大于D组,差异有统计学意义(P0.05)。 3、茜素红染色：随培养时间延长,细胞分泌的钙结节逐渐增多,P组细胞分泌的钙结节的积分光密度值较D组明显增加,差异有统计学意义(P0.05)。 4、激光共聚焦观察细胞骨架：随时间延长,细胞骨架从圆形逐渐向梭形、不规则多角形变化,肌动蛋白从网状排列逐渐拉长、互相平行排列,并横跨整个细胞；在各时间点,P组细胞骨架较D组更加伸展。 5、荧光实时定量PCR检测成骨基因表达：随着培养时间延长,两组细胞的基因表达量逐渐增加,将D组3d时基因表达水平定义为1,进行组内标准化,P组细胞的Cbfal和OCN基因表达量显著高于D组,差异有统计学意义(P0.05)。 6、扫描电镜观察细胞形态：随时间延长,细胞由较短的伪足逐渐变长变宽,数目也随之增多相互交织成网状,将细胞牢固的固定于钛片表面,在各时间点,P组细胞较D组细胞,在钛片表面有更好的排列伸展。 [结论] 1、PRF所释放的多种生长因子能有效的促进细胞的增殖、分化。 2、PP,F能促进细胞骨架的排列伸展,提高细胞在钛片表面的黏附力。
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R783.6

【参考文献】