克柔念珠菌对口腔上皮细胞的黏附作用及表达白细胞介素-8的影响

发布时间：2020-08-08 07:52

【摘要】： 背景：口腔念珠菌病是由念珠菌属感染所引起的口腔黏膜疾病。近年来,随着广谱抗生素、细胞毒性药物及免疫抑制剂的广泛应用,艾滋病、糖尿病、恶性肿瘤患者的增多,器官移植术及导管介入等各种治疗手段的开展,宿主的免疫功能低下或发生菌群失调,使得口腔念珠菌病的发病率迅速上升。尽管白色念珠菌是主要的条件致病性真菌,但毒力较弱的菌种如克柔念珠菌的感染也在免疫力低下的患者中频频发生。口腔念珠菌病的发病机制受到很多因素影响,不仅与念珠菌菌体本身的形态,菌体表面结构及黏附力有关,还与宿主的免疫防御机制有关。白色念珠菌黏附于宿主上皮是其在宿主中形成集落及入侵体内的第一步,也是念珠菌具有强致病性的标志。白细胞介素-8(IL-8)是中性粒细胞强有力的趋化因子,在免疫调节和炎症过程中发挥双重作用。大量国内外研究表明在口腔念珠菌病中,白色念珠菌可以激发口腔黏膜上皮细胞产生IL-8等细胞因子,参与黏膜局部防御反应。然而有关克柔念珠菌对口腔黏膜上皮细胞黏附作用的研究并不多见,克柔念珠菌单独及与白色念珠菌混合感染后口腔黏膜上皮细胞表达IL-8参与口腔黏膜防御反应的研究国内还未见报道。 目的：本实验通过克柔念珠菌与口腔黏膜上皮细胞的共同培养,探讨克柔念珠菌对口腔黏膜上皮细胞的黏附作用。应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫反应(ELISA)从mRNA和蛋白水平上观察克柔念珠菌单独及与白色念珠菌混合感染对口腔黏膜上皮细胞(KB细胞)表达IL-8的影响,初步探讨IL-8在口腔黏膜上皮细胞防御克柔念珠菌感染中的可能作用。 方法：1.在体外将克柔念珠菌与KB细胞共同培养,以白色念珠菌与KB细胞的黏附作为对照组,黏附后的细胞爬片经革兰染色,倒置显微镜下计数100个上皮细胞上黏附的念珠菌数。胰酶消化后收集细胞及念珠菌,台盼蓝排斥实验检测念珠菌的总数及菌丝转换率。2.将克柔念珠菌的孢子相和菌丝相菌悬液及与白色念珠菌混合后的孢子相和菌丝相菌悬液分别与KB细胞共同培养,以单独培养的KB细胞作为对照组,于6、12、24、48小时提取培养上清液,酶联免疫反应(ELISA)检测上清液中IL-8的蛋白含量。3.用Trizol法提取共同培养24小时后的总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-8的mRNA水平。实验数据间差异进行t检验,判断其统计学意义。 结果：1.克柔念珠菌黏附于KB细胞有时间依赖性,在24小时内随着时间的延长,黏附数逐渐增多,与对照组白色念珠菌比较,克柔念珠菌的黏附数低于白色念珠菌；克柔念珠菌黏附KB细胞后,其形态从孢子相向菌丝相的转变也有时间依赖性,在24小时内随时间的延长,菌丝转换率逐渐增高,但克柔念珠菌的总数却减少。2.KB细胞基础表达少量的IL-8蛋白,在克柔念珠菌单独及与白色念珠菌混合感染KB细胞后表达IL-8的蛋白水平均高于对照组；克柔念珠菌菌丝相单独及与白色念珠菌菌丝相混合感染KB细胞后表达IL-8的蛋白水平高于孢子相；培养上清液中IL-8的表达随时间的延长而逐渐增加,24小时达到高峰,随后出现下降趋势；克柔念珠菌感染KB细胞后表达IL-8的蛋白水平,无论是孢子相还是菌丝相,均高于克柔念珠菌和白色念珠菌的混合感染。3.克柔念珠菌单独及与白色念珠菌混合感染KB细胞24小时后,表达IL-8mRNA的水平均高于对照组；克柔念珠菌菌丝相单独及与白色念珠菌菌丝相混合感染KB细胞后表达IL-8mRNA的水平高于孢子相；克柔念珠菌的孢子相及菌丝相感染KB细胞后表达IL-8mRNA的水平均高于克柔念珠菌与白色念珠菌混合的孢子相及菌丝相。 结论:1.克柔念珠菌对口腔上皮细胞的黏附作用有时间依赖性,克柔念珠菌对宿主细胞的黏附能力弱于白色念珠菌。2.克柔念珠菌形态从孢子向菌丝的转换可以帮助念珠菌逃避宿主的防御反应,与致病性有一定的关系。3.克柔念珠菌在mRNA和蛋白水平上能增强口腔上皮细胞表达IL-8,提示IL-8可能与局部克柔念珠菌感染的防御反应相关。4.克柔念珠菌与白色念珠菌混合感染时表达IL-8的含量低于克柔念珠菌单独感染,提示克柔念珠菌与白色念珠菌之间可能存在相互拮抗作用。
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R781.52
【图文】：

(一)、克柔念珠菌与KB细胞的乳附结果(见图l):克柔念珠菌与KB细胞的豁附有时间依赖性，在24小时内随着时间的延长，勃附数逐渐增多。与对照组白色念珠菌比较，克柔念珠菌的豁附数低于白色念珠菌，P<0.05，差异有统计学意义。

注:克柔代表克柔念珠菌，白念代表白色念珠菌(以‘卜同此)图2.克柔念珠菌的总数及菌丝转换率的结果Fig2.ThetotalnumberofCandidaKruseiandresultofthetransformationofhyPhaeform二、IL一8蛋白含量的检测结果(见表1，图3)1.KB细胞基础表达少量的IL一8蛋白，在克柔念珠菌单独及与白色念珠菌混合感染KB细胞后表达IL一8的蛋白水平均高于对照组，P<0.05，差异有统计学意义。2.克柔念珠菌的菌丝相感染KB细胞后表达IL一8的蛋白水平与抱子相比较无差异，P>0.05;克柔念珠菌与白色念珠菌的菌丝相棍合感染KB细胞后表达IL一8的蛋白水平高于抱子相混合感染，P<0.05，差异有统计学意义。3.抱子相和菌丝相克柔念珠菌单独及与白色念珠菌混合感染KB细胞后表达IL一8的蛋白水平有时间依赖性，随时间的延长，表达逐渐增加，24小时达到高峰，随后略有降低。

表1.IL一8蛋白含量的检测结果(p留ml，肚s)Tab1.TheresultofIL一8proteinlevels(p留ml，壮s)实验组对照克柔抱子相克柔菌丝相克柔+白念抱子相克柔+白念菌丝相16.391士023.038士1.65932.813士1.10627.730士1.65935.550土0.55363.310士2.212104.363士6.08272.693士5.52947.670士1‘10675.43肚7.188119.611士9.95382.468土2.76529.294士0.55330.858士1.65949.234士1.工0641.805土0.55337.505士1.10649.234士16.58864.483士1.65951.58士1.186

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本文编号：2785283