人B7-H3基因增强特异性抗口腔肿瘤免疫的体内研究

发布时间：2020-08-18 20:35

【摘要】： 目的：研究B7-H3基因体内增强特异性抗口腔肿瘤免疫作用。 方法：构建人B7-H3基因腺病毒表达载体,采用人免疫重建荷人口腔鳞癌SCID小鼠嵌合模型,模型动物随机分为四组,每组6只：对照组(Ⅰ组)、B7-H3组(Ⅱ组)、空载体组(Ⅲ组)、非免疫重建组(Ⅳ组),瘤体内分别注射人B7-H3基因腺病毒表达载体(Ⅱ组)、未转染任何基因的腺病毒表达载体(Ⅲ组)和等体积PBS (Ⅰ、Ⅳ组),记录小鼠成瘤潜伏期；每周定期用游标卡尺检测肿瘤生长速率；于第4、7周分别尾静脉取血,ELISA检测人IgG含量,评估小鼠免疫重建是否成功；九周后处死模型动物,RT-PCR、免疫荧光显微镜检测肿瘤组织人B7-H3mRNA蛋白表达；流式细胞仪检测SCID鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞；比较各组小鼠脾脏重量；取小鼠脾脏组织行CD3免疫组化染色验证人源T细胞。 结果：1.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组小鼠成瘤潜伏期分别为11.91+0.98、10.49±1.39、10.21+0.747.89±1.30天,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组较Ⅳ组明显延长。2.第4、7周检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组小鼠外周血人IgG含量分别为30.37±2.15、189.65±15.10；36.51±1.45、168.97±13.01；41.88±9.26、179.46±17.67μg/ml;第Ⅳ组未检测到IgG含量。Ⅱ组小鼠脾脏人CD3分子免疫组化结果阳性,其它组未测得。3.荧光显微镜观察B7-H3组小鼠肿瘤组织可见大量绿色荧光,RT-PCR检测到人B7-H3 mRNA表达,其余各组均未检测到B7-H3表达。4.Ⅱ组小鼠肿瘤体积(1560.76±45.87mm3),小于其它组(Ⅰ组3708.64±188.97,Ⅲ组3988.65±196.98,Ⅳ组6800.20±451.34)(P0.05),生长明显受到抑制。5.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组均能检测到人CD4+、CD8+T淋巴细胞,Ⅱ组CD4+、CD8+T淋巴细胞比率分别为18.5±1.4、21.6±1.0(%),显著高于Ⅰ(14.5±2.1、13.8±0.5)、Ⅲ(15.8±2.26、13.4±1.7)组(P0.05)。6.Ⅱ组小鼠脾重大于其它组(P0.05)。 结论：人免疫重建荷人口腔鳞癌SCID小鼠嵌合模型构建成功；在整体水平显示,人B7-H3基因在肿瘤组织的表达增强能成功诱导CD4+、CD8+T淋巴细胞增殖,产生有效的特异性抗肿瘤免疫应答。
【学位授予单位】：汕头大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R739.8
【图文】：

I、11、111组小鼠在第4、7周外周血中均可检测到人IgG，分别为30.37士2.15、189.65士15.10;36.51士1.45、165.97士一3.01;41.55士9.26、179.46士17.67林g/ml;第IV组没有检测到IgG含量(表1)。免疫重建组小鼠脾脏免疫组化结果提示人CD3表达阳性(图1)。3.2人B7一H3基因在肿瘤组织中的表达B7一H3组(11组)，荧光显微镜下观察到肿瘤组织表达大量绿色荧光(图2)。RT一PCR检测到人B7一H3mRNA表达(图3)，其余各组均未检测到B7一H3表达。提示B7一H3腺病毒表达载体感染成功，在肿瘤组织中能稳定表达。3.3人B7-H3基因表达对SCID鼠成瘤潜伏期和肿瘤大小的影响小鼠在9周内无死亡，未出现明显的行为及生活习性改变，也没有皮疹、腹泻发生，主要脏器组织检查无明显GVHD。成瘤率均为100%，PBS对照组(IV组)成瘤潜伏期为7一9天，免疫重建三组为H一14天，潜伏期明显延长(P<0.01)

I组111组IV组11组图7各组小鼠脾脏解剖，n组脾脏受到刺激增长thesPleensseParatedfromSCID而eebearinghIJmanoralsquamousfromInieeof11grouPweremorebiggerinvolumethanothergouPs.鼠外周血中人cD4十、cDS+T淋巴细胞比率(%)检测结果(n=6)14.5士2.113.8士0.518.5士1.421.6士1.0*I巧.8士2.2613.4士1.70.000.00

4.2人B7一H3在肿瘤组织中的表达:B7一H3组(II组)，荧光显微镜下观察到肿瘤达大量绿色荧光(图l)。RT一PCR检测到人B7一H3mRNA表达(图2)，其余各组均未B7一H3表达。提示B7一H3腺病毒表达载体感染成功，在肿瘤组织中能稳定表达。

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本文编号：2796689