正畸牙齿称动中牙周血管内皮生长因子（VEGF）的表达在骨改建中的作用机制

发布时间：2020-08-25 07:05

【摘要】：血管生成对骨的发育、改建和愈合起着重要的作用。血管内皮细胞生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF)是1989年Ferrara等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先分离纯化出来的糖蛋白，它是内皮细胞的特异性有丝分裂原，也是一种有效的血管形成和血管通透性诱导因子。自被发现以来，VEGF的家族成员逐步增加，目前在哺乳动物中已发现有六种就是：VEGF、胎盘生长因子(PLGF)、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和VEGF-E。参与VEGF发挥生物功能的受体目前有四种：VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3和神经菌毛蛋白(neuropilin)。VEGF可能是调节其他骨生长因子重要的介质。目前，许多学者正在致力于应用重组的VEGF进行治疗性的血管生成和转基因技术在骨形成方面的应用研究。 血管内皮生长因子(VEGF)一直被认为是生理和病理的血管生成的重要调节因子，骨形成是和血管生成密切相关的，血管的侵入是骨化的先决条件。在骨的发育和骨的再生、再塑过程中，血管的生成和骨及软骨重塑是一个必须的过程，而且它们是相互影响和紧密联系的。组织学研究发现：成骨细胞和成骨样细胞总是比邻存在于新骨形成区域的血管上皮细胞附近，在骨的重塑过程中毛细血管上皮细胞提供了微脉管系统。目前己基本确认血管 第四军医大学博士学位论文 的侵入是骨形成的必要条件。这些结果均提示在骨的发育和骨的 再生再塑过程中有一个共同的调节因子。 目前已确认VEGF做为血管生成因子可由多种类型细胞产生， 包括成纤维细胞、平滑肌细胞、肥大软骨细胞、成骨细胞等，自 Ferr盯a和Henzel首次分离出血管内皮细胞生长因子以来，众多学 者对其家族成员和其受体进行了广泛和深入的研究。已有大量有 力的证据证明VEGF家族成员在血管上皮细胞和成骨细胞的生成 和分化过程中起有至关重要的作用。再者VEGF调节的血管生成 是骨形成的必要条件，因为增加VEGF的表达可以刺激骨形成。 近年来，在了解血管生成和骨形成之间密切关系的细胞机制方面 取得了重大进展。因此，VEGF可能是以上生物过程中必须的调节 因子。 目前对VEGF和骨发生作用机制之间关系的研究多集中于骨缺 损及修复方面，关于VEGF与机械力介导的正畸成骨的相关性研究 尚未见报道。在最近的研究中有学者证明:在骨缺损的动物模型 中外源性的VEGF可以促进血管的形成和骨化。因此，VEGF有可 能在促进骨形成方面应用于临床，在这方面的进一步的研究是有 广阔前景的。正畸牙齿移动过程的实质是牙及牙周组织的改建过 程，其中尤以牙槽骨的改建最为重要，它是骨吸收和骨形成的动 态平衡过程，这一过程机制复杂，受多种因子的调节。VEGF可能 对成骨细胞等多种细胞的迁移和分化有作用，与骨改建可能有显 著相关性。本研究拟从细胞水平以及分子水平探讨正畸牙齿移动 过程中牙周组织的改建和修复机制，以及研究VEGF对加速组织 修复和牙齿移动的影响及作用机制，为正畸移动牙齿进一步提供 理论和实践依据。本研究内容如下: 一正畸牙周组织改建过程中VEGF表达变化的研究 目的:观察大鼠正畸牙齿移动的牙周组织改建过程中VEGF表达 的变化，探讨vEGF与正畸牙齿移动的关系。方法:(l):建立大 第四军医大学博士学位论文 鼠磨牙移动实验模型，在1、3、7、14、Zld后，处死大鼠，固定， 制作第一磨牙牙周组织切片，HE染色观察牙周组织形态学变化， 免疫组化进行半定量分析VEGF:6;的表达。结果:VEGF在正常大 鼠牙周组织中表达很弱甚至不表达，牙齿移动1d后，牙周组织细 胞VEGF表达增强，7d、14d后表达达到高峰，此时亦可看到成骨 细胞胞浆呈强表达，以后VEGF表达有所下降，但仍高于对照组。 (2):在大鼠上领第一磨牙根分叉处注射rRVEGF并加力，于加力后 l、3、7、14、Zld测量牙齿移动距离。免疫组化进行半定量分 析VEGF16;的表达。结果:VEGF注射组牙齿移动速度高于对照组。 结论:vEGF参与了正畸牙周组织改建过程，在组织修复过程中可 能起到很重要的作用。 二.机械力加载下人牙周膜细胞和大鼠成骨细胞中VEGF的表 达变化研究 目的:观察机械力加载下人牙周膜细胞和大鼠成骨细胞中 VEGF 的表达变化情况的研究，在细胞水平探讨VEGF与正畸牙齿移动 的关系。方法:(1):培养人牙周膜细胞并做鉴定，利用细胞加力 装置，持续施加牵张力，分别于1、3、5、7d取材，用免疫组化 和原位杂交技术，检测细胞中VEGF的表达。结果:随着加载时间 的延长，VEGF表达强度明显增强，阳性细胞数显著增加，对机 械力反应明显，在5d达到高峰后又有下降趋势。(2):培养大鼠 的成骨细胞并做鉴定，利用细胞加力装置，持续施加牵张力，分 别于1、3、5、7d取材，用免疫组化和原位杂交技术，检测细胞 中VEGF的表达。结果:随着加载时间的延长，VEGF表达强度明 显增强，阳性细胞数显著增加，对机械力反应明显。结论:本实 验从蛋白和基因水平证实人牙周膜细胞及大鼠成骨细胞在机械力 作用下分泌的VEGF参与了牙周组织的修复和改建。 三.细胞因子对机械力加载下人牙周膜细胞中VEGF表达的影响 目的:观察BMP及TGF一p对人牙周膜细胞VEGF表达?
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2004
【分类号】：R783.5
【图文】：

第四军医大学博创卜学位论文表明本实验成功建立了大鼠正畸牙移动及牙槽骨改建模型。2.2免疫组织化学染色结果(附图3、4、5、6)正常大鼠的牙周组织中基本上未见有明显的VEGF的阳性表达，在个别片子中可见到极浅的棕黄色着色。正畸加力组大鼠牙周组织中VEGF表达增强，表达贯穿正畸牙周组织改建的全过程，血管内皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞和破骨细胞胞浆内可见其阳性表达。ld组压力侧检测到有散在的VEGF的阳性信号，3d组压力侧VEGF表达增强，张力侧也有VEGF的表达，7、14d为表达高峰期，Zld组VEGF表达又有所减弱(见表3、图3)。表3正畸组与对照组大鼠牙周组织中VEGF表达的半定量分析(x士s)正常对照组加力ld组加力3d组加力7d组加力14d加力Zld组张力侧(T)压力侧(P)101士108士3.7113士3.1142士3.6*149士2.9*110士2，8103士2.120士3.2*125士2.1*136士3.5*148士2.7*107士2.经SPSS10.O统计软件分析进行独立样本非参数检验

图4VEGF注射组和对照组在张力侧和压力侧VEGF免疫组化的图象分析结果3.讨论我们已经知道一些化学调节介质，如前列腺素、1，25一(OH)2D3也可通过增加破骨细胞来加速牙齿的移动。与这些因子相比，VEGF可诱导血管生成，更适用于调节创伤的愈合。因此，在正畸牙齿移动中，牙槽骨的改建是骨吸收和新骨形成的动态平衡过程。这一过程机制复杂，受多种因子的调节。VEGF是血管生成的重要调节因子，它是内皮细胞特异性最强的丝裂原，具有特异性促进血管增殖的作用，曾被称为血管调理素(VasculotroPin，VAs)‘”。又因为它能改变血管通透性，促使血浆蛋白的渗出，形成富含纤维素并有利于新血管形成的细胞外基质，故也称为血管渗透因子(vaseularperme汕ilityracto:，vPF)121。VEGF在许多组织和培养的细胞内均有表达，包括骨组织及培养。，，

VEGFRT一P

【引证文献】

相关硕士学位论文 前2条

1 孙慧芳;正畸加载时机和持续时间对自体移植牙牙周修复预后的研究[D];山东大学;2011年

2 陈冲;辛伐他汀对牙周炎大鼠牙移动保持阶段BMP-2、VEGF表达影响的实验研究[D];吉林大学;2010年

本文编号：2803413