黄癸素联合用药的抗肿瘤疗效及抗肿瘤转移和抑制仓鼠颊癌作用的研究

发布时间：2020-08-27 13:43

【摘要】： 目的:本研究观察黄癸素联合用药的体内和体外抗肿瘤作用;黄癸素抗肿瘤转移作用及其机制;黄癸素对化学诱导的仓鼠颊癌的防治作用。方法:(1)应用MTT法检测黄癸素联合临床常用药对体外培养肿瘤细胞增殖的抑制作用。(2)应用小鼠移植性实体瘤H22、S180的治疗试验观察黄癸素联合5-FU的体内抗肿瘤活性。(3)通过琼脂糖凝胶电泳法测定黄癸素对SW480细胞DNA拓扑异构酶活性的影响。(4)细胞-基质粘附实验检测黄癸素对B16细胞粘附能力的影响。(5)划痕实验检测黄癸素对B16细胞迁移能力的影响。(6)应用Transwell小室重建基底膜侵袭实验分析黄癸素对B16细胞趋化能力的影响。(7)免疫S-P法测定黄癸素对肿瘤细胞转移相关因子CD44V6表达的影响。(8)明胶酶谱法测定黄癸素对肿瘤细胞分泌基质金属酶MMP-2、MMP-9表达和活性的影响。(9)黄癸素对B16细胞C57BL/6小鼠实验性肺转移的影响。(10)黄癸素对H22细胞小鼠实验性肺转移的影响。(11)建立DMBA诱导的仓鼠颊囊癌变的动物模型,于6周、9周和12周系统观察黄癸素治疗组和对照组的局部病变情况,实验结束进行病理学检查。结果: 一、黄癸素联合用药的抗肿瘤疗效及相关机制黄癸素联用羟喜树碱对SGC-7901、SW116、HepG2、SW480细胞具有显著的协同抑制作用,与5-FU联用对MGC-803、SGC-7901、SW116细胞具有协同抑制作用;与5-FU合用可显著抑制小鼠H22、S180实体瘤的在体生长;黄癸素对拓扑异构酶都Ⅰ、Ⅱ的活性均有抑制作用。二、黄癸素抗肿瘤转移作用及其机制初探黄癸素可抑制B16细胞与基质及内皮细胞的粘附,抑制作用呈浓度依赖性。划痕实验中,在原始致伤区的基础上,用药组细胞在Fn上的迁移均受到明显抑制。Transwell小室,药物与细胞作用48h后,细胞穿越基底膜的能力显著低于对照组,细胞侵袭数与药物浓度成反比。通过黄癸素作用的肿瘤细胞培养上清所表达的MMP-2、MMP-9活性较对照组有显著的降低。在体试验显示黄癸素有一定程度抑制C57BL/6小鼠黑色素瘤肺转移、小鼠H22肝癌肺转移的作用。三、黄癸素对化学诱导仓鼠颊癌的抑制作用黄癸素36、54、72mg/kg分别作用于DMBA诱导的仓鼠,第9周开始高剂量即有抑制病变发生的作用,第12周病理检查见其颊粘膜的不典型增生发生率、鳞癌发生率均有不同程度降低,54、72mg/kg组仓鼠颊粘膜的不良增生总发生率分别为66.6%、53.3%,比模型组(86.6%)分别降低了20%和33.3%。结论:黄癸素与5-FU、羟喜树碱对体外培养的多种肿瘤细胞具有协同抑制作用,可能与其对拓扑异构酶都Ⅰ、Ⅱ活性的抑制作用有关。在体试验表明黄癸素与5-FU合用可显著抑制小鼠H22、S180实体瘤的在体生长。细胞试验显示黄癸素可降低B16细胞的粘附、侵袭和迁移能力。在体试验显示黄癸素可抑制B16黑色素肿瘤和H22肝癌的肺转移。黄癸素对化学诱导仓鼠颊癌有抑制作用。
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R285.5;R739.8
【图文】：

肿瘤组织学,联用

联合黄癸素中高剂量治疗组与 5-FU 组比较瘤细胞密度降低，同时有炎性细胞浸润，以淋巴细胞及粒细胞多见巴细胞及粒细胞多见（图 1.1）。图1.1 黄癸素联用5-FU对小鼠肿瘤H22的影响——各组肿瘤组织学观察（HE，10×40 ）。A：生理盐水组；B：25mg/kg 5-FU；C：90mg/kg 黄癸素；D：90mg/kg黄癸素联用25mg/kg5-FU2.4 黄癸素联用 5-FU 对小鼠移植性肿瘤 S180 的作用小鼠 S180 移植瘤试验结果显示，黄癸素联用 5-FU 对肿瘤增长的抑制率高于单用等剂量黄癸素（P<0. 01）和 5-FU，表现为相加或协同效果，并与黄癸素和 5-FU 均有剂量依赖关系（表 1.8）。同时发现，各组动物的体重增长与对照组比较均有减缓，但黄癸素组较 5-FU 组和二药联用组更轻（P<0. 01），而联合用与5-FU组相比没有显著性差异，可见体重增长减缓的主要原因可能来自于5-FU。A BC D16

DNA拓扑异构酶Ⅰ,超螺旋,拓扑异构酶,等剂量

注：与生理盐水对照组比较，*表示P<0.05，**表示P<0.01▲：与等剂量HB组比较，P<0.05，▲▲：与等剂量HB组比较，P<0.01癸素对 DNA 拓扑异构酶的影响黄癸素对 DNA 拓扑异构酶Ⅰ活性的影响pBR322DNA 为超螺旋 DNA（下图第一泳道），当拓扑异构酶作用322DNA，其仅有缺口和线性 DNA（第二泳道），当黄癸素 2mg/L(如第 TopoⅠ已有明显抑制作用，缺口和线性 DNA 减少，超螺旋 DNA 增多浓度提高，超螺旋 DNA 增多、缺口和线性 DNA 减少更明显。pBR322 pBR322 pBR322 pBR32 pBR32 pBR322 pBR322+酶 +酶+HGS +酶+HGS +酶+HGS2 +酶+HGS2 羟喜树碱1mg/L 2mg/l 4mg/L 8mg/LHB 90/5-FU 30 2.4±1.6**▲▲0.715±0.556**▲▲72.03

DNA拓扑异构酶Ⅱ

图 1.3 黄癸素对 DNA 拓扑异构酶Ⅱ活性的影响讨论黄癸素的先导化合物盐酸小檗碱已有研究证明其具有抑制多种肿瘤细胞生诱导分化和凋亡的作用。但是盐酸小檗碱口服难吸收，静脉注射副作用多，消化道抗生素应用有其优势，但是生物利用度低，难以通过口服给药发挥全作用如抗肿瘤等作用，成为阻碍小檗碱扩大临床应用的瓶颈所在。黄癸素是碱鱼腥草素离子对化合物，其生物利用度提高，且本室的前期研究显示其同有显著的体内外抗肿瘤作用，具有深入研究的价值空间。联合化疗是利用联用药物之间的协同作用取得比单药更好的效果。联合用药药物对肿瘤细胞的打击面增宽，同时减少了耐药性的发生，减轻药物的毒性。的是，几种药物联合之后，若存在协同作用，将有利于总疗效的提高。因此

【参考文献】