CD-TK双自杀基因系统对腺样囊性癌ACC-2细胞放疗增敏的作用研究

发布时间：2020-09-01 18:06

　　目的腺样囊性癌(adenoid cystic careinoma)又称圆柱瘤(cylindroma),占涎腺肿瘤的5%～10%,在涎腺恶性肿瘤中占24%,其中在颌下腺及舌下腺中是居首位的恶性肿瘤,最多见的年龄是40～60岁。其主要的病理学特点为嗜神经侵犯及易于远处转移,目前对腺样囊性癌多主张采用手术联合放化疗的综合治疗为主,其五年生存率一般在60%左右,其10年、15年、20年生存率分别为30～39%、24～26%、12.5～21%,其疗效仍然不能令人满意。因此,探讨新的治疗方法具有极其重要的意义。近年来肿瘤的基因治疗发展迅速,主要的方法有自杀基因、免疫基因、多药耐药基因以及抗血管生成基因等。其中自杀基因被认为是最有前景的基因治疗方法之一。已有的研究证实双自杀基因治疗具有单自杀基因疗法无可比拟的优越性。王安训等的研究也显示HSV-TK/GCV系统具有放疗增敏作用,可以提高放疗对口腔鳞癌的敏感性。本研究旨在构建真核表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK,并共同转染ACC-2细胞,并应用前体药物干预,探讨其对ACC-2细胞在有氧与乏氧条件下的放疗增敏作用,以寻求更为有效的自杀基因治疗方法。方法重组表达质粒pIRES-CD及pIRES-TK以电穿孔方法共同转染至ACC-2细胞,然后以400μg/mL新霉素(Geneticin G418)筛选10d后获得稳定表达CD及TK基因的ACC-2细胞,提取该细胞的总RNA,RT-PCR检测CD、TK基因的表达。将阳性克隆的ACC-2细胞分别在有氧及乏氧条件下给予0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy不同剂量X线照射及前体药物GCV及5-FC干预,通过细胞克隆形成实验,以探讨双自杀基因及前体药物在有氧和乏氧条件下对ACC-2细胞放疗增敏作用的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析。结果RT-PCR检测到ACC-2/CD-TK中CD、TK基因的表达。随X线照射剂量的增大各组细胞放疗后克隆形成率均明显降低;有氧条件下X线照射ACC-2/CD-TK+前体药物组细胞存活分数均较相同照射剂量X线照射ACC-2及ACC-2/CD-TK细胞组低(P＜0.05);乏氧条件下X线照射ACC-2/CD-TK+前体药物组细胞存活分数均较相同照射剂量X线照射ACC-2及ACC-2/CD-TK细胞组低(P＜0.05);相同照射剂量各相应细胞组在有氧条件下细胞存活分数较乏氧条件下低。结论1.应用电穿孔的方法成功将pIRES-CD、pIRES-TK共同转染ACC-2细胞,并进行RT-PCR鉴定,获得了预期的228bp和361bp的片段,表明了目的基因CD和TK已整合到ACC-2细胞染色体DNA链中,并进行有效的转录及表达。 2.有氧条件下双自杀基因与其前体药物共同作用对ACC-2细胞具有明显的放疗增敏作用而且作用优于单自杀基因的应用。 3.乏氧条件下双自杀基因及其前提药物系统同样可以明显提高ACC-2细胞的放疗敏感性而且作用优于单自杀基因的应用。 4.相同照射剂量下各相应细胞组在有氧条件下的存活分数较乏氧条件下低,这与分子生物学研究结果一致。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2009
【中图分类】：R739.8

【参考文献】