TRAF6对成牙本质细胞功能的调控作用的研究
发布时间：2020-09-16 16:41
成牙本质细胞是牙髓-牙本质复合体的特征性细胞,其功能是在牙齿发育期间和成熟牙内生成牙本质,它是牙齿中唯一能在牙本质形成与修复中起作用的细胞。因此,对成牙本质细胞的功能调控的研究有助于对牙齿发育、损伤与修复等过程的深入理解。 肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associatefactor,TRAF6)是近年来备受重视的细胞浆内的多功能信号分子,现己证实,它不仅与骨代谢和胚胎正常发育密切相关,还参与介导了LPS/IL-1、CD40和RANK的信号转导。牙本质作为牙齿硬组织,和骨组织的生物学特性有很多相似之处,那么TRAF6是否参与牙本质的发育过程?它对成牙本质细胞的增殖、矿化及损伤修复功能究竟发挥何种调控作用?本研究对于这些问题进行了探索性研究。具体内容如下: 1.TRAF6在鼠牙胚组织和成牙本质细胞中表达的研究 首先通过免疫组织化学染色的方法,在组织水平阐明了TRAF6几乎在大鼠牙胚发育全过程呈动态时空表达模式,尤其在成牙本质细胞呈持续强阳性表达。接着运用RT-PCR、免疫组织化学染色和免疫荧光染色的手段,分别从基因和蛋白水平首次证实了TRAF6在永生化成牙本质细胞样细胞MDPC-23中表达,为进一步研究TRAF6对成牙本质细胞功能的调控作用奠定了可靠的基础。 2.RNAi法研究TRAF6对成牙本质细胞增殖、矿化过程的调控作用 RNAi技术是当前研究基因功能的崭新的强有力工具。第一步,我们首先成功构建了2个pSUPER-TRAF6 siRNA的真核表达载体,并通过瞬
【学位单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2005
【中图分类】：R78
【部分图文】：
interactionmotisf，TIMs)，可分别与胞浆中T双FZ，5，6相结合，其中刀刃吓6的结合位点最靠近胞膜且具有高度特异性，TRA王6与TIM结合后可以激活下游信号I双(I沼hnase)[6，7]。(2)CD40也是TNFR超家族的成员，它被激活后，胞浆段包含两个独立的TRAFs结合结构域，其中Glu一235结合TRAF6，Thr一254结合TRAFZ，3，5，最终通过下游信号转导途径活化不同的转录因子，189]。(3)IL一IR接受IL一1刺激或Toll样受体(Toll一likereceptors，TLRs)超家族接受微生物产物如脂多糖(LPS)的刺激后，可能经过Tol/IlL一1受体家族To(U几一1erceptorf如11ily，11R)募集几一1受体相关激酶IL一IR一assoeiatedkinases，IRAK)s并结合TARF6[’0，川，这一作用和果蝇中的Pelle一dTRAF活化途径非蔚目侧12]。最近新发现几一1汀011样受体超家族成员Ton样受侧沼(孔咫)可以不依赖m决欠s途径而直接与TRAfl6结合引发其下游信号转导机制，[3l4]l。.总之，目前关于TRAF6上游分子相互作用机制仍是有待进一步研究的热门课题。
图.2BTRAF6的下游信号转导机制示意图(三)TRAF6的功能研究及其在牙科领域的研究成果基因敲除实验是系统地观察某种基因的功能的良好方法。Nati0A等1999年发现TRAF6一/一的E14.5一17.5小鼠表现为严重的骨骼硬化症，牙齿萌出缺陷，这些小鼠出生后身体短小且很少能存活2周以上129，30]。2000年有报道TRAF6一/一的El0.5一18.5小鼠表现出神经管闭合不全、露脑畸形及中枢神经系统发育异常，这些小鼠常在胚胎期或出生后立即死亡[3‘]。2002年研究表明TARF6一人El5.5一18.5及出生后d5的小鼠表现为少汗性外胚层发育不全综合征(hypohidrotieeetodemraldysplasia，HED)，包括表皮附件如皮脂腺、毛囊腺发育缺陷，而HED的小鼠模型及人类HED患者均表现有牙齿的缺失或形态异常[32l。2003年Aisuhsiohazama等[33]研究釉结节的小组通过原位杂交法观察了小鼠牙胚早期发育过程中由牙板上皮增厚到钟状早期之间TRAFS的表
图3RNAi作用机制示意图此外，现已证实，转录后基因沉默P(TGS)现象还可以由另外一A(smalltempora卿NRA，stRNA)途径亦即miNRA(microRNA)途径[4’]，但是miNRA和siRNA引起PTGs的机制有所不同。在生化机制或能上，miR训A与siRNA是相当类似的。它们的长度都约是二十个碱基，抑制基因表现的时候，大多是先变成单股RNA并且与其它蛋白质形个复合体，即RNA一niducedslineeeocmPlxe(RISC)，之后再将与之互mRNA分解。但是它们两者之间也有不同处，如前所述，SIRNA为双链，中的一条反义链最终通过抑制基因转录和/或使mRN.A降解而抑制基，产生RNAIP/TGS。而miRNA最明显的特征就是具有一个发夹的的单链(haiprni，即一条RNA中两端有互补的序列，中间有一小段不
本文编号：2820093
【学位单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2005
【中图分类】：R78
【部分图文】：
interactionmotisf，TIMs)，可分别与胞浆中T双FZ，5，6相结合，其中刀刃吓6的结合位点最靠近胞膜且具有高度特异性，TRA王6与TIM结合后可以激活下游信号I双(I沼hnase)[6，7]。(2)CD40也是TNFR超家族的成员，它被激活后，胞浆段包含两个独立的TRAFs结合结构域，其中Glu一235结合TRAF6，Thr一254结合TRAFZ，3，5，最终通过下游信号转导途径活化不同的转录因子，189]。(3)IL一IR接受IL一1刺激或Toll样受体(Toll一likereceptors，TLRs)超家族接受微生物产物如脂多糖(LPS)的刺激后，可能经过Tol/IlL一1受体家族To(U几一1erceptorf如11ily，11R)募集几一1受体相关激酶IL一IR一assoeiatedkinases，IRAK)s并结合TARF6[’0，川，这一作用和果蝇中的Pelle一dTRAF活化途径非蔚目侧12]。最近新发现几一1汀011样受体超家族成员Ton样受侧沼(孔咫)可以不依赖m决欠s途径而直接与TRAfl6结合引发其下游信号转导机制，[3l4]l。.总之，目前关于TRAF6上游分子相互作用机制仍是有待进一步研究的热门课题。
图.2BTRAF6的下游信号转导机制示意图(三)TRAF6的功能研究及其在牙科领域的研究成果基因敲除实验是系统地观察某种基因的功能的良好方法。Nati0A等1999年发现TRAF6一/一的E14.5一17.5小鼠表现为严重的骨骼硬化症，牙齿萌出缺陷，这些小鼠出生后身体短小且很少能存活2周以上129，30]。2000年有报道TRAF6一/一的El0.5一18.5小鼠表现出神经管闭合不全、露脑畸形及中枢神经系统发育异常，这些小鼠常在胚胎期或出生后立即死亡[3‘]。2002年研究表明TARF6一人El5.5一18.5及出生后d5的小鼠表现为少汗性外胚层发育不全综合征(hypohidrotieeetodemraldysplasia，HED)，包括表皮附件如皮脂腺、毛囊腺发育缺陷，而HED的小鼠模型及人类HED患者均表现有牙齿的缺失或形态异常[32l。2003年Aisuhsiohazama等[33]研究釉结节的小组通过原位杂交法观察了小鼠牙胚早期发育过程中由牙板上皮增厚到钟状早期之间TRAFS的表
图3RNAi作用机制示意图此外，现已证实，转录后基因沉默P(TGS)现象还可以由另外一A(smalltempora卿NRA，stRNA)途径亦即miNRA(microRNA)途径[4’]，但是miNRA和siRNA引起PTGs的机制有所不同。在生化机制或能上，miR训A与siRNA是相当类似的。它们的长度都约是二十个碱基，抑制基因表现的时候，大多是先变成单股RNA并且与其它蛋白质形个复合体，即RNA一niducedslineeeocmPlxe(RISC)，之后再将与之互mRNA分解。但是它们两者之间也有不同处，如前所述，SIRNA为双链，中的一条反义链最终通过抑制基因转录和/或使mRN.A降解而抑制基，产生RNAIP/TGS。而miRNA最明显的特征就是具有一个发夹的的单链(haiprni，即一条RNA中两端有互补的序列，中间有一小段不
【引证文献】
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1 王樱泽;林鸿旺;洪水清;任邦鹏;;人牙髓细胞向成牙本质细胞诱导分化中细胞周期变化[J];热带医学杂志;2008年01期
本文编号：2820093
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