慢性牙周炎普雷沃菌的耐药基因筛查及变黑普雷沃菌的初步毒力分析

发布时间：2017-04-02 21:19

  本文关键词：慢性牙周炎普雷沃菌的耐药基因筛查及变黑普雷沃菌的初步毒力分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：研究慢性牙周炎患者在治疗过程中厌氧菌的菌群变化,对分离鉴定出的厌氧菌进行抗生素敏感性分析及耐药基因检测,为合理选用抗生素治疗慢性牙周炎中的厌氧菌感染提供理论依据,为明确牙周普雷沃菌耐药性演变提供生物学基础。初步分析其中变黑普雷沃菌的毒力特征,了解变黑普雷沃菌的毒力与临床症状的关系。方法：1.2012年1月至2013年12月,于复旦大学附属华山医院口腔科选取12例慢性牙周炎患者(男6例,女6例,年龄：41±10岁)为研究对象。初诊及每次复诊均采用椅旁慢性牙周炎牙周袋取样,接种于厌氧基础平板,应用简易厌氧袋培养法,经两至三次耐氧实验,培养的牙周专性厌氧菌以16S rRNA分子生物学技术进行鉴定。2.根据美国临床实验室标准化协会(Clinical Laboratory Standards Institution)推荐的琼脂稀释法参考方案(M11-S220)分别测定牙周专性厌氧菌对临床常用抗菌药物头孢曲松、头孢拉定、头孢克肟、阿莫西林、克林霉素、罗红霉素、甲硝唑、多西环素、亚胺培南的敏感性。3.采用PCR法分别检测普雷沃菌株nim、cfxA、ermF、tetQ耐药基因,研究其普遍性与发生耐药之间的关系。4.根据16SrRNA分子生物学技术的鉴定结果,选取了临床患者标本培养所获得的5株变黑普雷沃菌以小鼠背部脓肿形成实验初步分析变黑普雷沃菌的毒力特征。结果：1.简易厌氧袋培养法分离培养的细菌具有良好的专性厌氧特性及传代增殖能力。共计培养得84株专性厌氧菌,经16S rRNA序列测定技术鉴定,其中普雷沃菌68株,其他菌株16株,普雷沃菌的分离率81%。2.药敏试验结果显示：慢性牙周炎中普雷沃菌对亚胺培南的耐药率为0%,对头孢曲松、头孢拉定、头孢克肟的耐药率分别为2.94%、4.41%和2.94%,对克林霉素、罗红霉素、阿莫西林的耐药率分别为22.06%、17.64%和8.82%,对甲硝唑和多西环素耐药率分别为4.88%和2.94%。3.普雷沃菌耐药菌株的耐药基因检测结果显示：68株普雷沃菌中,cfxA检出率为73.53%,相关的耐药菌株cfxA检出率为90%；ermF检出率为58.82%,相关的耐药菌株ermF检出率为71.43%；tetQ检出率为51.47%,相关的耐药菌株tetQ检出率为50%；nim检出率为2.94%,相关的耐药菌株nim检出率为40%。用药前,73.33%普雷沃菌含有耐药基因,耐药率1.47%；用药后,97.37%普雷沃菌含有耐药基因,耐药率52.63%。4.5株产黑普雷沃菌与阴性对照相比均有毒力,与阳性对照变黑普雷沃菌ATCC25845相比有1株毒力相当,其余四株毒力较弱,毒力强弱与临床患者疾病程度正相关。结论：1.普雷沃菌属是慢性牙周炎厌氧菌群中的优势菌之一,随着牙周系统性治疗的延续,厌氧菌的种类逐渐减少。2.慢性牙周炎来源的普雷沃菌对抗菌药物的耐药性不同,对口腔临床常用药物,克林霉素及罗红霉素呈现的耐药性较高为22.06%,17.64%；对青霉素类和甲硝唑的耐药性的增长也需要引起注意。因此,在使用抗生素治疗慢性牙周炎之前,建议进行厌氧菌抗生素敏感性监测,以减少耐药菌的产生。3.不同耐药基因在耐药的普雷沃菌中检出率存在差异。本实验中,cfxA、 ermF耐药基因在耐药的普雷沃菌中检出率较高；而多西环素及甲硝唑耐药菌株的耐药基因检出率较低,因此对于tetQ及nim的耐药基因的普遍性还需进一步研究。经过用药患者的牙周袋内检测到的细菌出现不同程度的耐药,原有的耐药基因与耐药的演变存在极大的相关性。4.临床变黑普雷沃菌的毒力分析显示毒力与临床上标本来源患者的慢性牙周炎严重程度及治疗周期相关。慢性牙周炎反复发作可能与滞留有毒力较强的细菌有关。
【关键词】：慢性牙周炎 厌氧菌 普雷沃菌 药敏试验 耐药基因 毒力
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R781.42
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 缩略词表8-10
• 前言10-12
• 第一部分 慢性牙周炎患者治疗过程中厌氧菌的分离培养与鉴定12-21
• 材料与方法12-16
• 结果16-19
• 讨论19-20
• 结论20-21
• 第二部分 普雷沃菌对9种抗生素的耐药性检测及相关耐药基因的筛查21-38
• 材料与方法22-28
• 结果28-32
• 讨论32-37
• 结论37-38
• 第三部分 测定变黑普雷沃菌的生长曲线及其毒力的初步分析38-45
• 材料和方法38-40
• 结果40-44
• 讨论44
• 结论44-45
• 全文总结45-46
• 参考文献46-53
• 综述53-62
• 参考文献59-62
• 学位论文和科研成果62-63
• 致谢63-64

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本文编号：283186