舌鳞状细胞癌中STAT3调控miRNA-21表达的实验研究

发布时间：2017-04-03 00:07

  本文关键词：舌鳞状细胞癌中STAT3调控miRNA-21表达的实验研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：口腔颌面-头颈癌是世界第六大常见癌症,舌癌为口腔癌中最常见的恶性肿瘤,其中鳞状细胞癌占舌癌病理类型的80%以上,因而阐明舌鳞状细胞癌发病机理、寻找更为有效的治疗手段是舌癌研究领域的关键问题。 信号转导与转录活化因子3(signal transducers and activators of transcription3, STAT3)是信号传导与转录活化因子家族的重要成员。STAT3对维持正常生理具有重要作用,在正常细胞和组织中,它的活化状态是短暂而且被精确调控的。STAT3的持续激活可导致细胞异常增殖和恶性转化。研究证实STAT3在多种恶性肿瘤如乳腺癌、头颈部鳞状细胞癌、结直肠癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、白血病等均有过度表达,并与肿瘤的生长、分化、转移密切相关。STAT3可被多种细胞因子(IL-6)、受体酪氨酸激酶(EGFR)和非受体酪氨酸激酶(Jak、Src、Abl等)激活,是多个致癌性酪氨酸激酶信号通道的汇聚焦点。活化的STAT3相互作用形成同源或异源的二聚体转入细胞核,参与调节与肿瘤细胞增殖、凋亡、转移相关的靶基因的转录。研究显示在头颈鳞癌患者中,肿瘤组织和正常组织上皮中STAT3的表达水平均高于非癌患者正常上皮。提示STAT3信号通路的持续激活在人舌鳞状细胞癌的进展和侵袭中发挥重要作用。 研究证实miRNA(microRNA)的表达与多种癌症相关,异常表达的miRNA在癌症的发生发展过程中起到类似癌基因或抑癌基因的作用。目前,研究发现多种miRNA在舌癌中表达失调并与舌癌的发生发展及预后密切相关。miR-21是人类细胞或组织中发现较早的、存在较为广泛的miRNA之一。早期的研究证实miR-21在胶质瘤、肺癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中表达升高；并能够通过抑制PTEN、PDCD4、TIMP3、TIMP-1、RECK、p53等抑癌基因的翻译过程参与调控多种恶性肿瘤的发生。一项miRNA表达谱研究结果提示miR-21在头颈部鳞状细胞癌和食管鳞状细胞癌细胞系中均为高表达。另一项舌癌miRNA表达谱研究同样表明在103例舌鳞状细胞癌标本中miR-21为高表达,反义miR-21能够抑制舌癌细胞系SCC-15和Cal-27的生长。我小组前期研究提示：转染反义miR-21寡核苷酸后,Tb3.1舌癌细胞增殖与侵袭能力被抑制。上述研究结果都提不]niR-21可能以一种原癌基因的身份影响着舌癌的发生、进展。 近年来miRNA与STAT家族成员的相互关系,尤其miR-21和STAT3信号通路的相互作用得到初步阐述。利用生物信息学方法预测了miR-21编码基因启动子区域有STAT3的结合位点。编码miR-21基因的调节区位于跨膜49基因的内含子中,并为上游增强子所调控,而该增强子调控序列含有两个STAT3的结合位点,推测IL-6/STAT3抗凋亡信号通道是miRNA-21潜在的调控机制。研究显示在骨髓瘤细胞中,miR-21的转录可受到其上游包含2个STAT3结合位点的增强子的直接调控。敲低STAT3的表达后发现可阻碍由IL-6介导的miR-21的表达。 然而,目前在舌鳞癌中STAT3与miR-21之间的调控关系的研究尚未见报道。本课题通过大量的体内外实验研究明确在舌鳞状细胞癌中STAT3转录调控miR-21表达的分子机制。共分以下二部分： 第一部分：应用免疫组织化学染色法检测60例人舌鳞状细胞癌不同分化程度的临床手术标本中STAT3的表达；应用原位杂交法检测标本中miR-21的表达,结果发现STAT3与miR-21在舌鳞癌中均为异常高表达,且两者的表达间存在正性相关性。 第二部分：应用western blot、RT-PCR、免疫组化、荧光素酶报告实验,染色体免疫共沉淀等多种体内外实验方法验证舌鳞癌中STAT3转录调控miR-21表达的分子机制。
【关键词】：舌鳞状细胞癌 JAK/STAT3 miR-21 转录
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R739.86
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、舌鳞状细胞癌中STAT3与miR-21表达的相关性研究14-26
• 1.1 前言14
• 1.2 材料和方法14-20
• 1.2.1 标本与试剂来源14-18
• 1.2.2 实验方法18-20
• 1.2.3 统计方法20
• 1.3 结果20-22
• 1.3.1 STAT3在舌鳞癌中过表达并与分化程度负相关20-21
• 1.3.2 miR-21在舌鳞癌中过表达并与分化程度负相关21-22
• 1.3.3 STAT3与miR-21在舌鳞癌中正性相关22
• 1.4 讨论22-25
• 1.5 小结25-26
• 二、STAT3调控miR-21表达的体内外实验研究26-66
• 2.1 前言26-27
• 2.2 材料和方法27-41
• 2.2.1 实验材料27-29
• 2.2.2 实验方法29-41
• 2.2.3 统计方法41
• 2.3 结果41-63
• 2.3.1 STAT3、pSTAT3与miR-21在舌癌细胞系中的表达41-42
• 2.3.2 MTT实验检测WP1066半数抑制浓度IC_(50)值42-43
• 2.3.3 WP1066处理后舌癌细胞STAT3与miR-21的表达变化43-49
• 2.3.4 WP1066处理后舌癌细胞的表型变化49-57
• 2.3.5 荧光素酶基因报告实验检测WP1066处理后舌癌细胞荧光活性变化57-58
• 2.3.6 染色质免疫共沉淀实验验证舌癌细胞中STAT3转录调控miR-21的表达58-59
• 2.3.7 动物实验59-63
• 2.4 讨论63-65
• 2.5 小结65-66
• 结论66-67
• 参考文献67-72
• 发表论文和参加科研情况说明72-73
• 综述 STAT3的研究进展73-85
• 综述参考文献80-85
• 致谢85-86

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 杨玉彬;韦炳华;李琼;秦鉴;;禁食疗法调节月经周期的病例报道及其机理探讨[J];今日药学;2013年11期

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1 潘倩;高加索人群银屑病易感位点与中国汉族人寻常型银屑病相关性研究[D];安徽医科大学;2013年

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本文编号：283373