柴胡皂苷D对白念珠菌和热带念珠菌生物膜的影响

发布时间：2020-10-12 03:13

　　 目的： 体外观察白念珠菌和热带念珠菌生物膜生长动力学特点；体外测定柴胡皂苷D对白念珠菌和热带念珠菌的最低抑菌浓度及其对两种念珠菌生物膜形成不同阶段的MIC50，探讨柴胡皂苷D在微克浓度水平对两种念珠菌生物膜形成后的抑菌效果，为临床筛选抗真菌药物提供一定的理论依据。 方法： 第一部分：分别将标准株白念珠菌ATCC32354和热带念珠菌CBS94活化后稀释成浓度为1×106/ml的菌悬液并以100μl/孔接种到96孔微量培养板中，用MTT分析法分别测定在接种后3h、6h、12h、24h、48h、72h、96h的念珠菌生物活性并分别绘制白念珠菌和热带念珠菌生长曲线。 第二部分：分别将已活化的白念珠菌和热带念珠菌稀释后，振荡器上振荡15s后用血球细胞计数板调节其浓度至1×10~5～5×10~5/ml，用真菌RPMI1640培养基按1：100稀释成菌浓度为1×10~3～5×10~3/ml，采用微量稀释法测定柴胡皂苷D对白念珠菌和热带念珠菌的最低抑菌浓度（MIC80）。使用96孔微量培养板设定8个浓度，同时以只加对应菌悬液及真菌RPMI1640培养液各100μl作为阳性对照，只加真菌RPMI1640培养液200μl/孔作为空白孔调零。 第三部分：分别将标准株白念珠菌和热带念珠菌活化后稀释成浓度为1×106/ml的菌悬液，以100μl/孔接种到96孔微量培养板中，将培养板置于37℃恒温培养箱培养2h后弃去原培养液，并用PBS轻柔洗去游离的菌细胞，每孔加入100μl新鲜真菌RPMI1640培养液，继续置于37℃恒温培养箱培养，每隔24h更换一次新鲜真菌RPMI1640培养液。分别在接种后3h、6h、12h、24h、72h取出对应培养板弃去最后培养液，加入浓度为1280μg/ml～10μg/ml的柴胡皂苷D继续置于37℃恒温培养箱培养24h后，采用MTT法分别测定两种念珠菌在以上各时间点的念珠菌活性并绘制曲线，选取柴胡皂苷D对白念珠菌和热带念珠菌的50%抑菌浓度（MIC50）进行分析比较。使用96孔微量培养板设定8个浓度，同时以只加对应菌悬液100μl/孔作为阳性对照，只加真菌RPMI1640培养液100μl/孔作为空白孔调零。 结果： 第一部分：白念组和热带组在3h、6h、12h、24h、48h、72h、96h各时间点上两者生物膜形成能力具有显著性差异，P0.05差异有统计学意义。白念珠菌和热带念珠菌生物膜活性增强与培养时间呈依赖性。白念珠菌在培养前24h生物膜活性增加最为明显，在培养48h之后生物膜活性维持在相对较高水平的平台期不再有明显的增长；热带念珠菌在培养前6h生物膜活性增加明显，在培养6h之后生物膜活性维持在相对较低水平的平台期不再有明显的增长。体外培养白念珠菌生物膜形成能力较热带念珠菌强。 第二部分：用MTT显示色后酶标仪测得柴胡皂苷D对白念珠菌和热带念珠菌MIC80分别为80μg/ml和320μg/ml与肉眼观察判断结果相符。 第三部分：柴胡皂苷D对白念珠菌和热带念珠菌生物膜形成的抑制作用随成膜时间的延长而减弱，通过柴胡皂苷D对两种念珠菌50%抑菌浓度比较发现，柴胡皂苷D在3h、6h、12h、24h、72h各时间点上对白念珠菌生物膜的抑制作用明显强于其对热带念珠菌生物膜的抑制作用，P0.05差异有统计学意义。柴胡皂苷D对热带念珠菌生物膜的50%抑菌浓度在72h时已经超过了微克浓度水平。 结论： 1．白念珠菌与热带念珠菌均能在96孔板中形成生物膜，生物膜形成后均能维持在相对较高水平，白念珠菌形成生物膜能力较热带念珠菌强。 2．柴胡皂苷D对白念珠菌和热带念珠菌生长均有明显的抑制作用，其对白念珠菌的抑制作用较热带念珠菌强。柴胡皂苷D对两种念珠菌的最低抑菌浓度分别为80μg/ml和320μg/ml，柴胡皂苷D在念珠菌治疗方面具有进一步研究开发的价值。 3．柴胡皂苷D对白念珠菌和热带念珠菌生物膜形成均有不同程度抑制作用，柴胡皂苷D抑制白念珠菌生物膜形成能力强于其抑制热带念珠菌生物膜形成能力。
【学位单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2012
【中图分类】：R781.54;R285
【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 白念珠菌和热带念珠菌生物膜的培养及生长动力学测定
    材料和方法
    结果
    讨论
第二部分 柴胡皂苷 D 对白念珠菌和热带念珠菌 MIC80的测定
    材料和方法
    结果
    讨论
第三部分 柴胡皂苷D对白念珠菌和热带念珠菌生物膜形成抑制作用研究
    材料和方法
    结果
    讨论
结论
参考文献
综述
    参考文献
致谢

【参考文献】

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本文编号：2837551