牙髓碱性磷酸酶的提纯、cDNA克隆和氢氧化钙对其活性、表达的影响

发布时间：2020-10-13 17:01

　　 碱性磷酸酶(ALP)是较为肯定的参与钙化的酶类。牙髓组织富含ALP，其性质与肝／骨／肾型ALP相似。研究牙髓ALP的生化性质将有助于阐明牙髓、牙本质的钙化修复机制。 氢氧化钙制剂是目前临床首选的盖髓药物，它具有独特的促进牙髓、牙本质修复的作用，但其作用机制尚不清楚。最新研究表明：牙髓细胞具有创伤后转化为造牙本质细胞的性质，因此，研究氢氧化钙对牙髓细胞的合成代谢的作用，对于进一步了解氢氧化钙的作用机制具有一定的意义。 本文采用正丁醇抽提法和层析法提纯了狗牙髓ALP。对其性质研究表明：牙髓ALP的PAGE图谱为1条带，分子量约为129000；热稳定性较差；最适pH10.1；底物浓度为6mmol／L时反应达到饱和、Mg~(2+)、Za~(2+)强烈激活、Ca~(2+)轻度激活、EDTA明显抑制ALP活性。牙髓ALP性质与肾ALP相似，属于L／B／K型ALP。 采用基因工程技术，研究细胞中基因表达情况，有助于从分子水平上了解药物的作用机理。从细胞全基因组文库中获得目的基因的工程量大，耗时耗力，且不现实。因此，我们以体外合成的大鼠L／B／K-ALP。cDNA的高保守性的ALP活性区的2段核苷酸序列为引物，采用反转录PCR和定序克隆获得大鼠L／B／K-ALP部分cDNA的分子克隆。酶切分析表明插入片段大小约为188bp，符合预期大小。 ~3H-TdR、~3HUR掺入结果显示：0.055mmol／L氢氧化钙具有促进大鼠牙髓细胞DNA、RNA合成的作用。以光敏生物素标记的大鼠L／B／K-ALP
【学位单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：1991
【中图分类】：R78
【部分图文】：

为ALP亚墓带，卫增为多条带，了2弓01〕(图1一6)、后者为牙髓ALP抽提物中的主要蛋白质。肾ALP电泳结合团金FAGE电泳结果，涌定肾ALP亚墓分子量七及DC阳，对。;66A肾从P4，，4.了14.;困卜6ALP的SDS一PAGE电泳图谱B牙髓ALPC标准分?

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【引证文献】

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本文编号：2839434