血小板浓缩生长因子对牙髓细胞和内皮细胞的促血管化作用研究

发布时间：2020-10-18 04:18

　　 牙髓血管再生/牙髓血运重建是治疗牙髓坏死的年轻恒牙的新方法,可达到促使牙根继续发育的临床效果,较传统的根管治疗具有明显的优越性。血小板浓缩生长因子(concentrate growth factors,CGF)是最新一代的血小板浓缩物,富含大量生长因子,能促进组织愈合,而且制备容易,生物相容性高,在口腔领域口腔种植,牙周手术等已有较多应用,但其在牙髓血管再生中的作用却鲜有研究。目的:以CGF体外作用于人牙髓细胞(dental pulp cells,DPCs)和人脐静脉血内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)。研究CGF对DPCs和HUVECs的成血管作用,为CGF在牙髓血管再生中的应用提供实验依据。方法:通过改良组织酶消化法分离获得人牙髓细胞后传代培养。取健康志愿者静脉血制成CGF,获得浓缩生长因子提取液(concentrate growth factors extracts,CGFe)。经剂量选择分为2%CGFe、5%CGFe、10%CGFe和15%CGFe不同浓度组为实验组,对照组培养基为仅含10%FBS的DMEM培养基,分别体外培养牙髓细胞和内皮细胞。CCK-8实验检测各组细胞增殖活性;qRT-PCR检测牙髓细胞VEGF、PDGF、CXCR4的mRNA表达;western blotting检测牙髓细胞VEGF、CXCR4的蛋白表达量;transwell实验检测CGFe对内皮细胞迁移的影响;体外成血管实验检测内皮细胞形成血管状结构的能力。结果:CCK-8结果显示CGFe能够明显促进牙髓细胞和内皮细胞的增殖,10%以内的CGFe促进牙髓细胞和内皮细胞增殖效果呈浓度依赖性(P0.05);15%CGFe对牙髓细胞增殖影响与10%CGFe无明显差异(P0.05);CGFe培养内皮细胞36h时,10%CGFe组较15CGFe组促进内皮细胞增殖作用更强(P0.05)。因此确定10%CGFe为最佳作用浓度,后续实验组仅采用2%CGFe、5%CGFe和10%CGFe三组。CGFe作用于DPCs 24h后牙髓细胞VEGF,PDGF,CXCR4 mRNA表量和VEGF,CXCR4蛋白表达量均较对照组明显升高,以10%CGFe基因表达上调最明显,且结果呈浓度依赖性(P0.05)。CGFe能促进内皮细胞的迁移,并促进体外形成血管状结构,10%CGFe作用效果最明显,且结果呈浓度依赖性(P0.05)。结论:CGF能促进牙髓细胞体外增殖和成血管分化;CGF能促进内皮细胞的增殖,迁移和体外形成血管状结构。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R781.3
【部分图文】：

牙髓细胞生长形态（X40）

CGFe对牙髓细胞增殖活性的作用（*：P<0.05）

PDGF，CXCR4，VEGFmRNA的表达（*：P<0.05）
【参考文献】

相关期刊论文 前3条

1 姜波;董凯;柳忠豪;;不同浓度CGF提取液对成骨细胞影响的实验研究[J];中国口腔种植学杂志;2014年04期

2 冯毅;马静;黄贞;;牙髓干细胞促进牙髓血管生成的相关分子机制研究[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2013年12期

3 ;Mesenchymal Stem Cells and Tooth Engineering[J];International Journal of Oral Science;2009年01期

本文编号：2845791