地塞米松对体外培养的人牙囊细胞成骨特性影响的实验研究

发布时间：2020-10-22 12:38

　　 牙囊是牙齿萌出前的牙胚中围绕造釉器和牙乳头的疏松外胚间充质组织。牙囊中含有形成牙周组织的前体细胞，在牙齿的发育过程中形成牙骨质、牙周膜和固有牙槽骨。目前认为牙囊靠近发育中的牙根的最内层发育为成牙骨质细胞，形成牙骨质；靠近牙槽骨的外层细胞分化为成骨细胞分泌骨基质；中间层发育为成纤维细胞并产生牙周膜的细胞外基质。由生长因子和细胞分子组成的调控网络控制牙囊细胞的发育和功能。牙骨质的形成依靠牙根的形成，牙根形成开始于内釉上皮和外釉上皮增殖形成的Hertwig’s上皮根鞘，来源于上皮根鞘的刺激开始了牙囊前体细胞向成牙骨质细胞的分化。这些刺激物包括釉基质蛋白、层粘连蛋白、Ⅰ型胶原和转化生长因子β超家族等。 目前对于牙囊细胞的成骨特性研究集中于以下方面：1．体外培养培养牙囊细胞在体外的矿化和和体内成骨实验研究以及在此过程中的相关基因表达；2．胰岛素、地塞米松和BMP-2诱导下牙囊细胞向成骨细胞分化过程中，OCN、BMP-2、Cbfal、DLX—5、MSX—2等基因的mRNA的表达。迄今为止，已发现了许多对成骨细胞有影响的因素，其中包括多种生长因子如：骨形成蛋白(BMPs)、转化生长因子(TGF-β)、成纤维细胞生长因子(FGFs)、胰岛素样生长因子(IGFs)、血小板衍生生长因子(PDGF)、表皮生长
【学位单位】：第四军医大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2006
【中图分类】：R78
【部分图文】：

化物酶;滴加羊血清37℃温箱封闭30mni。滴加一抗后置入湿盒4℃过夜。一抗为兔抗人波形丝蛋白单克隆抗体。次日在37℃温箱复温lh，滴加二抗37℃孵育30min;加入辣根过氧化物酶复合物37℃下30mni;DAB加30nli/L过氧化氢液光镜下控制显色。用PBS液替代一抗设立空白对照，其余步骤不变。经苏木精核复染，逐级脱水透明后封片。2.结果接种72h后可见经消化松散贴壁的组织块周围有细胞呈放散状爬出，细胞形态多呈长梭形。组织块周围细胞亦生长旺盛，靠近组织块边缘混杂有部分立方形多角形形扁平细胞，细胞核大，考虑为上皮来源的细胞混入。培养的人牙囊细胞生长爬满需要14天。此时可以传代，利用差速消化法去除混杂的上皮细胞，一般在第二代以后就可以得到纯化的牙囊细胞。培养的人牙囊细胞呈梭形、纺锤形或多角形，具有成纤维细胞特性。波丝蛋白细胞染色阳性(图l、图2)。

化物酶;滴加羊血清37℃温箱封闭30mni。滴加一抗后置入湿盒4℃过夜。一抗为兔抗人波形丝蛋白单克隆抗体。次日在37℃温箱复温lh，滴加二抗37℃孵育30min;加入辣根过氧化物酶复合物37℃下30mni;DAB加30nli/L过氧化氢液光镜下控制显色。用PBS液替代一抗设立空白对照，其余步骤不变。经苏木精核复染，逐级脱水透明后封片。2.结果接种72h后可见经消化松散贴壁的组织块周围有细胞呈放散状爬出，细胞形态多呈长梭形。组织块周围细胞亦生长旺盛，靠近组织块边缘混杂有部分立方形多角形形扁平细胞，细胞核大，考虑为上皮来源的细胞混入。培养的人牙囊细胞生长爬满需要14天。此时可以传代，利用差速消化法去除混杂的上皮细胞，一般在第二代以后就可以得到纯化的牙囊细胞。培养的人牙囊细胞呈梭形、纺锤形或多角形，具有成纤维细胞特性。波丝蛋白细胞染色阳性(图l、图2)。

图9.实验组VonKossa染色(x20)等[1田通过体外培养牛牙囊细胞并提测，结果表明，细胞表达低水平的碱性骨桥蛋白和I型胶原的mRNA，未检达。王演等〔’ooj在体外培养的人胚胎的酸酶mRNA的低水平表达。以上研究结成骨特性。Zhoa等[69]的研究表明体外胞在rhBMP一2的诱导下向成骨细胞、rhBMP一2能增强骨钙蛋白、骨涎蛋
【引证文献】

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1 张楠楠;不同运动方式对模拟失重大鼠骨密度、骨代谢生化指标及股骨Osterix表达的影响[D];华东师范大学;2010年

本文编号：2851608