无血清培养法分选舌癌侧群细胞及其特性的鉴定

发布时间：2020-10-29 20:49

　　 目的探索人舌鳞癌细胞株Tca8113中侧群细胞的分选方法。方法利用流式细胞仪分选传统含血清培养方法获得的人舌鳞癌细胞系Tca8113中的侧群细胞(SP),并与无血清培养方法分离出的侧群细胞(TSC-SP)进行形态学比较和平板形成克隆实验及成瘤实验的比较,富集并验证肿瘤干细胞相关亚群。结果人舌癌细胞系Tca8113中SP细胞的含量为0.2%,而Tca8113细胞系的细胞在无血清培养基中能够成活,3~5 d后增殖并形成悬浮的肿瘤干细胞球,并随着培养时间的延长而肿瘤干细胞球体积增大和更加致密;而应用无血清悬浮法培养的Tca8113细胞系中TSC-SP细胞的含量为0.4%;SP与TSC-SP细胞在平板形成克隆实验的形成率均为100%;接种16 d后,104、105数量级的TSC-SP和SP接种裸鼠背部均出现瘤体。结论人舌鳞癌细胞系Tca8113中含极少量的SP细胞,利用无血清培养基可以达到富集肿瘤干细胞亚群的目的。
【部分图文】：

2. 1　普通培养基和无血清培养基中的Tca8113细胞的形态　　普通培养基中Tca8113呈贴壁生长(图1),部分细胞凋亡呈悬浮状态。普通培养基中处于生长期的Tca8113细胞移植于无血清培养基中, 24~48 h后,部分细胞聚集呈球状,而大部分细胞呈悬浮状(图2)。3~5 d后无血清培养基中的细胞球增多,体积变大,更加紧密。图1　倒置相差显微镜观察在普通培养基中呈贴壁生长的Tca8113(×200)图2　倒置相差显微镜观察在无血清培养基中呈悬浮生长的Tca8113　(×200)2. 2　Tca8113细胞系中TSC-SP与SP细胞的检测　　Tca8113细胞系中SP数量较少,约为0. 2%。而在无血清悬浮培养中的TSC-SP细胞的数量约为0. 4% (图3)。2. 3　TSC-SP与SP细胞交替在无血清培养基中和传统含血清培养中培养　　TSC-SP与SP所形成的肿瘤球接种于传统含血清培养基中

2. 2　Tca8113细胞系中TSC-SP与SP细胞的检测　　Tca8113细胞系中SP数量较少,约为0. 2%。而在无血清悬浮培养中的TSC-SP细胞的数量约为0. 4% (图3)。2. 3　TSC-SP与SP细胞交替在无血清培养基中和传统含血清培养中培养　　TSC-SP与SP所形成的肿瘤球接种于传统含血清培养基中,经诱导肿瘤干细胞分化为普通的肿瘤细胞,约12 h后部分细胞开始贴壁, 24~48 h后完全贴壁,显微镜下的贴壁细胞与传统含血清培养基培养下的贴壁细胞无明显差异;消化贴壁细胞后,重新悬于无血清培养基中, 3~5 d后仍可形成细胞球,其形态与原代相同。819第33卷第8期2011年4月30日　　　　　　　　　　第　三　军　医　大　学　学　报J　Third　Mil　Med　Univ　　　　　　　　　　Vo.l 33

率均为100% )。取相同数量细胞的平板克隆培养板,显微镜下观察均发现TSC-SP细胞所形成的克隆细胞数量较多,体积较大(图4A),而SP细胞所形成的克隆细胞数量较少,体积较小(图4B)。在相同数量细胞的平板克隆实验中,根据统计学分析,TSC-SP与SP均具有显著差异性(P<0. 05),相同数量的TSC-SP比SP具有较强的克隆形成能力(表1)。A:TSC-SP细胞;B:SP细胞图4　倒置相差显微镜观察TSC-SP细胞和SP细胞的平板克隆实验(初始细胞为100个,2. 5周×200)表1　平板克隆实验的细胞集落直径(第3周末,cm)细胞种类50个细胞100个细胞200个细胞TSC-SP 0. 080±0. 016 0. 180±0. 016 0. 318±0. 019SP 0. 060±0. 019 0. 150±0. 016 0. 280±0. 016P值0. 019 0. 04 0. 032. 5　体外成瘤实验的结果　　在相同条件下(观察时间0~8周)
【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 卞修武;;对肿瘤研究前沿之肿瘤干细胞的几点认识[J];第三军医大学学报;2008年11期

【共引文献】

相关期刊论文 前5条

1 陈丽;刘求真;邱际华;焦锋;姚开泰;;人Snail基因RNAi慢病毒载体对鼻咽癌5-8F细胞增殖和侵袭的影响[J];第三军医大学学报;2009年12期

2 刘美;李少林;陈宓;李小青;龙浩;;人结肠癌细胞株CW-2干细胞富集方法的比较[J];第三军医大学学报;2010年09期

3 刘凯;季平;邓诚;伍明毅;;人舌癌细胞株Tca8113中侧群细胞的分离及其ABCG2的表达[J];第三军医大学学报;2010年14期

4 程变巧;江艺;李东良;;thy-1与c-kit在肝癌中的表达与其分化程度的关系[J];第三军医大学学报;2011年02期

5 姜建勇;平轶芳;赵林涛;余时沧;王斌;卞修武;;趋化因子受体CXCR4活化促进人胶质瘤干细胞迁移及其机制探讨[J];肿瘤;2009年05期

相关博士学位论文 前1条

1 平轶芳;CXCR4在胶质瘤干细胞诱导血管生成中的作用及机制研究[D];第三军医大学;2009年

相关硕士学位论文 前3条

1 刘凯;人舌癌细胞株Tca8113中ABCG2蛋白表达的意义及其SP细胞群的分选[D];重庆医科大学;2010年

2 刘美;人结肠癌CW-2干细胞的分离纯化和生物学特性研究[D];重庆医科大学;2010年

3 姜建勇;胶质瘤干细胞CXCR4活化后细胞信号通路检测及生物学效应初步研究[D];第三军医大学;2009年

【二级参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 卞修武;;对肿瘤血管生成研究之肿瘤微血管构筑表型异质性的思考[J];中华病理学杂志;2006年03期

本文编号：2861434