BMP-2与TGF-β3对DPSCs成骨向分化的对比研究

发布时间：2020-11-02 06:43

　　 目的:对比研究转化生长因子-β3(Transforming growth factor-β3,TGF-β3)与骨形成蛋白-2(Bone morphogenic protein-2,BMP-2)分别对牙髓干细胞(Dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化潜能的影响。方法:健康新西兰幼兔4只,取牙髓组织采用酶解组织块法分离培养获得DPSCs,镜下观察细胞形态及生长状况。将培养的第3代DPSCs分为BMP-2组和TGF-β3组,分别加入浓度为80 ug/L的BMP-2、TGF-β3的完全培养液,采用免疫组织化学法于诱导第3、7天检测Ⅰ型胶原蛋白(Collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)表达,于第7、14天检测骨钙素(Osteocalcin,OCN)表达,应用IPP图像分析软件测量累计吸光度(Integrated optical density,IOD)值;诱导第7、14天,对BMP-2组、TGF-β3组进行碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色后,倒置显微镜下观察ALP活性染色结果。结果:兔DPSCs分离、培养约48 h,组织块周围有细胞游出、贴壁生长,培养的兔DPSCs大多为长梭形,也可为多角形,呈巢式或集落生长;TGF-β3组诱导第3天COL-1表达的IOD值(159676.799±63959.568)高于BMP-2组(44047.330±15853.656)(P0.05),诱导第7天COL-1表达的IOD值(245378.263±60084.607)与BMP-2组(223294.430±80266.723)比较差异无统计学意义(P0.05);TGF-β3组诱导第7天OC表达的IOD值(109568.817±14079.885)高于BMP-2组(55168.568±1694.930)(P0.05),诱导第14天OC表达的IOD值(411544.957±82803.243)与BMP-2组(360103.540±20835.362)比较差异无统计学意义(P0.05);BMP-2组、TGF-β3组诱导第7天出现少量淡蓝色的ALP阳性区,诱导第14天蓝色ALP阳性区增大且蓝染颜色加重,镜下观察2组无明显差异。结论:与BMP-2比较,TGF-β3对早期兔DPSCs向成骨细胞分化有较明显的促进作用。
【学位单位】：新疆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R78
【部分图文】：

新疆医科大学硕士学位论文结 果细胞形态学观察镜下观察酶解组织块法取得的兔牙髓干细胞，经过培养 2d 左右时就可见细围组织块游出（图 1a），可见细胞成长梭形贴壁生长。原代细胞经培养 7d 首次传代，传代细胞的兔牙髓干细胞多为长梭形，也可呈多角形状，镜下可均匀，胞核圆，呈巢式或集落生长（图 1b）。传代细胞约 5-7d 左右可达 80%汇可进行再次传代。

新疆医科大学硕士学位论文表 1 TGF-β3 组、BMP-2 组 OCN、COL-Ⅰ表达的 IOD 值比较 （ x±s）Tab 1 Comparison of IOD values of OCN and COL-I between TGF-β3 group and BMP-2 grou组别COL-1 OCN第 3 天 第 7 天 第 7 天 第 14 天BMP-2 组 44047.33±15853.65223294.43±80266.7255168.56±1694.93360103.5420835.3TGF-β3 组 159676.79±63959.56245378.26±60084.60109568.82±14079.88411544.9582803.2t 值 6.219 0.376 3.801 5.888P 值 0.038 0.722 0.003 0.356注：P＜0.05 为差异有统计学意义。

3d 3e 3f图 3 a 为 PBS 阴性对照组；b 为 BMP-2 组诱导第 7 天；c 为 BMP-2 组诱导第 14 天；d 为 PBS 性对照组；e 为 TGF-β3 组诱导第 7 天；f 为 TGF-β3 组诱导第 14 天。Fig.3 Immunohistochemical staining for OCN after 7d，14d（200x）3 TGF-β3 组、BMP-2 组 ALP 染色结果比较BMP-2 组、TGF-β3 组诱导第 7 天出现少量淡蓝色的 ALP 阳性区，诱导第 14 蓝色 ALP 阳性区增大且蓝染颜色加重，镜下观察 2 组无明显差异，如图 4。
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本文编号：2866708