c-Myc调控的长链非编码RNA7对舌鳞癌细胞增殖的研究
发布时间：2020-11-05 05:25
目的探究由c-Myc调控的长链非编码RNA7(long non-coding RNA7,lncRNA7)对舌鳞状细胞癌(Tongue Squamous Cell Carcinoma,TSCC)SCC3细胞增殖的影响,从而为舌鳞癌寻找一种新的分子治疗靶点。方法构建 pLKO.l-shc-Myc-ctrl、pLKO.1-shc-Myc、Flag、Flag-c-Myc 四种慢病毒载体,分别转染SCC3细胞,Western Blot检测各组载体转染细胞后细胞中c-Myc蛋白的表达情况;qRT-PCR检测各组载体转染细胞后细胞中lncRNA7的表达水平;再构建 pLKO.l-shlncRNA7-ctrl、pLKO.1-shlncRNA7 两种慢病毒载体,qRT-PCR 分别检测两组载体转染SSC3细胞后细胞中lncRNA7的表达情况;MTT法和细胞克隆实验用于检测lncRNA7对SCC3细胞生长和增殖能力的影响;荧光原位杂交实验检测lncRNA7在SCC3细胞中的定位。结果Western Blot检测c-Myc蛋白表达结果显示,与pLKO.1-shc-Myc-ctrl对照组相比,pLKO.1-shc-Myc组蛋白表达下调;与Flag对照组相比,Flag-c-Myc组蛋白表达上调;qRT-PCR结果显示pLKO.1-shc-Myc组lncRNA7的表达水平较pLKO.1-shc-Myc-ctrl 对照组降低;Flag-c-Myc 组 lncRNA7 的表达水平较 Flag 对照组升高;pLKO.1-shlncRNA7 组 lncRNA7 表达水平较 pLKO.1-shlncRNA7-ctrl 组下调;MTT法和细胞克隆实验结果显示,与pLKO.l-shlncRNA7-ctrl组相比,pLKO.1-shlncRNA7组SCC3细胞生长和增值能力减弱:荧光原位杂交实验结果表明lncRNA7定位于细胞质中。结论下调受c-Myc正调控的lncRNA7能抑制舌鳞癌SCC3细胞的生长和增殖,从而可能为舌鳞癌的基因治疗提供新靶点。
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.86
【部分图文】：
蛋白的表达情况。从实验结果可以看出，ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ组ｃ－Ｍｙｃ蛋白表达水平明??显低于ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ－ｃｔｒｌ对照组，说明ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ组载体下调了?ＳＣＣ３细胞??中的ｃ－Ｍｙｃ的表达（图１）。??分别将构建成功的Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组和Ｆｌａｇ对照组的表达载体转染入ＳＣＣ３细胞??中，通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ实验检测其中ｃ－Ｍｙｃ蛋白的表达情况。从实验结果可以看出，??Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组ｃ－Ｍｙｃ蛋白表达水平明显高于Ｆｌａｇ对照组，说明Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组载体上??调了ＳＣＣ３细胞中的ｃ－Ｍｙｃ的表达（图２）。??ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ?Ｆｌａｇ?Ｆｌａｇ－??－ｃｔｒｌ对照组?－Ｍｙｃ组?对照组?ｃ＿Ｍｙｃ组??ｃ－Ｍｙｃ?．?ｃ＿Ｍｙｃ??Ａｃｔｉｎ?Ａｃｔｉｎ??图１下调ＳＣＣ３细胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表达?图２上调ＳＣＣ３细胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表达??Ｆｉｇ．?１?Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｆｉｇ．?２?Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ??ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ??３．?２?ｑＲＴ－ＰＣＲ实验方法检测ｃ－Ｍｙｃ对ｌｎｃＲＮＡ７表达的影响??通过ｑＲＴ－ＰＣＲ实验方法分别捡测成功转染了?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ组和??２６??
通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ实验检测其中ｃ－Ｍｙｃ蛋白的表达情况。从实验结果可以看出，??Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组ｃ－Ｍｙｃ蛋白表达水平明显高于Ｆｌａｇ对照组，说明Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组载体上??调了ＳＣＣ３细胞中的ｃ－Ｍｙｃ的表达（图２）。??ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ?Ｆｌａｇ?Ｆｌａｇ－??－ｃｔｒｌ对照组?－Ｍｙｃ组?对照组?ｃ＿Ｍｙｃ组??ｃ－Ｍｙｃ?．?ｃ＿Ｍｙｃ??Ａｃｔｉｎ?Ａｃｔｉｎ??图１下调ＳＣＣ３细胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表达?图２上调ＳＣＣ３细胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表达??Ｆｉｇ．?１?Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｆｉｇ．?２?Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ??ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ??３．?２?ｑＲＴ－ＰＣＲ实验方法检测ｃ－Ｍｙｃ对ｌｎｃＲＮＡ７表达的影响??通过ｑＲＴ－ＰＣＲ实验方法分别捡测成功转染了?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ组和??２６??
ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ－ｃｔｒｌ对照组的ＳＣＣ３细胞中ｌｎｃＲＮＡ７的表达情况。从实验结果可以??看出，ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ组ＳＣＣ３中ｌｎｃＲＮＡ７表达水平明显低于ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ－ｃｔｒｌ??对照组，说明ＳＣＣ３细胞中ｌｎｃＲＮＡ７的表达水平随ｃ－Ｍｙｃ的下调而降低（图３）。??通过ｑＲＴ－ＰＣＲ实验方法分别检测成功转染了?Ｈ?ａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组和Ｆｌａｇ对照组的??ＳＣＣ３细胞中ｌｎｃＲＮＡ７的表达情况。从实验结果可以看出，Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组ＳＣＣ３中??１?ｎｃ?ＲＮ?Ａ７表达水平明显高于Ｆ１?ａｇ对照组，说明ＳＣＣ３细胞中１?ｎｃ?ＲＮ?Ａ７的表达水平随??ｃ－Ｍｙｃ的上调而升高（图４）。从正反两面结果均表明
【参考文献】
本文编号：2871192
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.86
【部分图文】：
蛋白的表达情况。从实验结果可以看出，ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ组ｃ－Ｍｙｃ蛋白表达水平明??显低于ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ－ｃｔｒｌ对照组，说明ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ组载体下调了?ＳＣＣ３细胞??中的ｃ－Ｍｙｃ的表达（图１）。??分别将构建成功的Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组和Ｆｌａｇ对照组的表达载体转染入ＳＣＣ３细胞??中，通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ实验检测其中ｃ－Ｍｙｃ蛋白的表达情况。从实验结果可以看出，??Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组ｃ－Ｍｙｃ蛋白表达水平明显高于Ｆｌａｇ对照组，说明Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组载体上??调了ＳＣＣ３细胞中的ｃ－Ｍｙｃ的表达（图２）。??ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ?Ｆｌａｇ?Ｆｌａｇ－??－ｃｔｒｌ对照组?－Ｍｙｃ组?对照组?ｃ＿Ｍｙｃ组??ｃ－Ｍｙｃ?．?ｃ＿Ｍｙｃ??Ａｃｔｉｎ?Ａｃｔｉｎ??图１下调ＳＣＣ３细胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表达?图２上调ＳＣＣ３细胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表达??Ｆｉｇ．?１?Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｆｉｇ．?２?Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ??ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ??３．?２?ｑＲＴ－ＰＣＲ实验方法检测ｃ－Ｍｙｃ对ｌｎｃＲＮＡ７表达的影响??通过ｑＲＴ－ＰＣＲ实验方法分别捡测成功转染了?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ组和??２６??
通过Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ实验检测其中ｃ－Ｍｙｃ蛋白的表达情况。从实验结果可以看出，??Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组ｃ－Ｍｙｃ蛋白表达水平明显高于Ｆｌａｇ对照组，说明Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组载体上??调了ＳＣＣ３细胞中的ｃ－Ｍｙｃ的表达（图２）。??ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ?Ｆｌａｇ?Ｆｌａｇ－??－ｃｔｒｌ对照组?－Ｍｙｃ组?对照组?ｃ＿Ｍｙｃ组??ｃ－Ｍｙｃ?．?ｃ＿Ｍｙｃ??Ａｃｔｉｎ?Ａｃｔｉｎ??图１下调ＳＣＣ３细胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表达?图２上调ＳＣＣ３细胞中ｃ－Ｍｙｃ后蛋白表达??Ｆｉｇ．?１?Ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｆｉｇ．?２?Ｕｐｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｃ－Ｍｙｃ?ｐｒｏｔｅｉｎ??ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｉｎ?ＳＣＣ３?ｃｅｌｌｓ??３．?２?ｑＲＴ－ＰＣＲ实验方法检测ｃ－Ｍｙｃ对ｌｎｃＲＮＡ７表达的影响??通过ｑＲＴ－ＰＣＲ实验方法分别捡测成功转染了?ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ组和??２６??
ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ－ｃｔｒｌ对照组的ＳＣＣ３细胞中ｌｎｃＲＮＡ７的表达情况。从实验结果可以??看出，ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ组ＳＣＣ３中ｌｎｃＲＮＡ７表达水平明显低于ｐＬＫＯ．?１－ｓｈｃ－Ｍｙｃ－ｃｔｒｌ??对照组，说明ＳＣＣ３细胞中ｌｎｃＲＮＡ７的表达水平随ｃ－Ｍｙｃ的下调而降低（图３）。??通过ｑＲＴ－ＰＣＲ实验方法分别检测成功转染了?Ｈ?ａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组和Ｆｌａｇ对照组的??ＳＣＣ３细胞中ｌｎｃＲＮＡ７的表达情况。从实验结果可以看出，Ｆｌａｇ－ｃ－Ｍｙｃ组ＳＣＣ３中??１?ｎｃ?ＲＮ?Ａ７表达水平明显高于Ｆ１?ａｇ对照组，说明ＳＣＣ３细胞中１?ｎｃ?ＲＮ?Ａ７的表达水平随??ｃ－Ｍｙｃ的上调而升高（图４）。从正反两面结果均表明
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 Wei-Jun Cao;Hai-Lu Wu;Bang-Shun He;Yu-Shu Zhang;Zhen-Yu Zhang;;Analysis of long non-coding RNA expression profiles in gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2013年23期
本文编号：2871192
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/kouq/2871192.html
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