电压门控钾离子通道亚型Kv3.4参与口腔鳞癌的增殖、侵袭与凋亡

发布时间：2020-11-13 22:22

　　 目的口腔鳞癌(OSCC)是我国口腔颌面部肿瘤中最常见的恶性肿瘤之一,常有区域淋巴结和远处转移。针对口腔鳞癌治疗困难、致死率高的特点,越来越多的学者将目光聚集在分子靶向治疗上。目前,针对性分子靶向治疗手段,逐渐成为OSCC综合序列治疗中至关重要的一部分,而寻求更精准有效的分子靶点,也成为了OSCC治疗的关键。一些研究表明,VGPC与多种癌症密切相关,包括口腔鳞癌。其中,VGPC亚型Kv3.4与肿瘤的关系是一个热门话题。本研究旨在探究Kv3.4在口腔鳞癌细胞中的表达,以及改变Kv3.4表达水平后引起的口腔鳞癌细胞侵袭、增殖、凋亡改变,从而验证Kv3.4与口腔鳞癌发生发展的关联,并初步探索其作用机制,为口腔鳞癌的预防与治疗寻找新靶点。方法培养口腔鳞癌细胞系SCC3,并使用激光共聚焦显微镜确认Kv3.4在SCC3细胞中的表达。使用脂质体转染小干扰RNA(siRNA-KCNC4),敲除OSCC细胞系SCC3中表达Kv3.4的KCNC4基因,使用qRT-PCR和Western Blot验证Kv3.4在mRNA和蛋白质表达水平的改变。使用CCK-8、Transwell检测转染后SCC3细胞增殖和侵袭能力的变化。流式细胞仪用于检测转染后的细胞凋亡和细胞周期变化。使用Western Blot检测细胞周期蛋白、侵袭相关蛋白表达水平变化。对实验检测所得数据进行统计学检验,分析两组数据使用t检验,分析超过两组数据使用单因素方差分析。结果免疫细胞化学显示Kv3.4在SCC3细胞的细胞质与细胞膜上广泛表达。转染siRNA-KCNC4后,随着Kv3.4表达水平降低,SCC3细胞的增殖能力下降(P0.001),侵袭能力下降(P0.001),凋亡增加(P0.001),这表明Kv3.4可能参与口腔鳞状细胞癌的发展。实验结果同时表明,KCNC4基因敲除后细胞周期蛋白cyclin D1、cyclin E1和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达显著下降,细胞周期G0/G1停滞,这代表着Kv3.4对口腔鳞癌的调控,可能是通过周期蛋白、基质金属蛋白酶来实现。结论Kv3.4可以通过调控细胞周期、调控MMPs表达,影响口腔鳞癌的生物学行为。推测Kv3.4可能是口腔鳞癌侵袭、增殖和凋亡调控网络中的重要靶点,具有进一步研究的价值。
【学位单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R739.8
【部分图文】：

1：Kv3.4 在 SCC3 细胞中的定位。A：DAPI 将细胞核染为蓝色。B：Kv3.4 蛋染为红色。C：二者合成图像。igure 1: Locate Kv3.4 in the SCC3 cell line..2 SiRNA 转染效果评估通过 qRT-PCR 和 Western blot 实验证实 siRNA 降低了 Kv3.4 的表达水平。RT-PCR 实验证明，转染三条 siRNA 后，KCNC4 基因的 mRNA 的相对表达量分为：s1（0.13±0.01），s2（0.16±0.07），s3（0.1±0.03），与 control 组（1±0.22）比，表达水平显着降低，差异具有统计学意义（F=39.1，P<0.001）。而 mock 组0.74±0.07）和 si-NC 组（0.84±0.13）与 control 组相比，差异无统计学意义。中，s3 具有最高的沉默效率（见图 2）。Western blot 实验证明，s3 组的 Kv3.4

图 7：沉默 KCNC4 后侵袭和凋亡相关蛋白表达水平的变化。A：cyclin D1 和 cyclinE1 蛋白表达水平下降。B：MMP-9 蛋白表达水平降低。C：caspase-3 和 cleavedcaspase-3 蛋白表达水平增加。Figure 7: Changes in the expression levels of invasion and apoptosis related proteinsafter silencing KCNC4. A: cyclin D1 and cyclin E1 protein expression level decreased.B: MMP-9 protein expression level decreased. C: caspase-3 and cleavedcaspase-3protein expression level increased.5 讨论Kv3.4 属于 Kv1-9 亚家族，由 KCNC4 基因编码。研究显示，电压门控钾离子通道的光谱阻断剂能够抑制多种细胞增殖能力，这可能是由于 VGPC 异常表达，
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本文编号：2882723