巯基蛋白酶水解人全唾液的效率和影响因素

发布时间：2020-11-16 20:14

　　 目的:探讨三种巯基蛋白酶(菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶)在不同盐浓度、pH值和温度环境中水解人全唾液生物膜的效率。方法:收集非刺激性的人全唾液(whole saliva, WS),采用消散因子石英晶体微天平(QCM-D)在体外原位、实时和动态监测人非刺激性全唾液在Au石英晶体芯片形成生物膜,用菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶在不同盐浓度、pH值和温度环境中水解唾液生物膜。采用3倍频和归一化方法记录频率改变(△F)和能量消散因子改变(△D)随时间的变化。用分析软件计算膜的质量减小量(△m)和厚度减小量(△h)。通过△m和△h评价蛋白酶水解唾液生物膜的效果。结果:菠萝蛋白酶在盐浓度0.001~0.01 M时,△m和△h无明显变化,高于0.01 M时,△m和△h随着盐浓度的升高而减小。木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶分别在盐浓度为0.005 M和0.05 M时,△m和△h最大,水解效率最高,低于或高于该盐浓度,水解效率都降低。随着pH值的升高,菠萝蛋白酶的△m和△h减小,水解效率降低,即pH 5.9pH 6.9pH 7.9(P0.05);无花果蛋白酶的△m和△h增加,水解效率升高,即pH 5.9pH 6.9pH 7.9(P0.05);木瓜蛋白酶则受pH值的影响较小,在pH 5.9时较高。随着温度的升高,三种蛋白酶的△m和△h都增加,水解效率升高,都在35℃时最大。结论:三种巯基蛋白酶水解人全唾液生物膜的效率都受到盐浓度、pH值和温度的影响;三种蛋白酶之间水解效率不同,无花果蛋白酶在中性和碱性环境中水解效率最高,菠萝蛋白酶则在酸性环境下水解效率最高。
【学位单位】：福建医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2010
【中图分类】：R780.2
【部分图文】：

10图1 实验流程图3.2 试剂的配制（1）标准蛋白质溶液：用牛血清清蛋白(BSA)，配制成 1.0 mg/mL 的标准蛋白质溶液。（2）考马斯亮兰 G-250 染料试剂：称 10 mg 考马斯亮兰 G-250，溶于 5 mL 95%的乙醇后，再加入 12 mL 85%的磷酸，用水稀释至 100 mL。（3）0.2 mol/L，pH 6.9 的磷酸钠盐缓冲液：用分析天平准确量取 1.4040 gNaH2PO4·2H2O 和 3.9395 g Na2HPO4·12H2O，溶解于 50 mL 超纯水中，在磁力搅拌器上搅拌至完全溶解

图 3 WS 吸附于 Au 表面，△F 和△D 随时间的变化曲线2.2 Au 表面吸附的唾液生物膜的特性WS 吸附于 Au 表面达到稳定状态时 m 和 h 的数值见表 3，均数和标准差见表 4。结果显示本研究共做 108 次实验，每次在 Au 表面吸附得到的唾液生物膜的质量（m）为 1017±36 ng/cm2，厚度（h）为 9.21±1.20 nm。表 3 唾液生物膜的△F、△D、m 和 h 的测量值样本号△F(Hz)△D(10-6)m(ng/cm2)h(nm)样本号△F(Hz)△D(10-6)m(ng/cm2)h(nm)1 173.24 6.00 1020 9.10 55 174.94 9.50 1030 8.402 161.35 6.70 950 7.60 56 171.54 7.60 1010 8.603 172.39 6.00 1015 9.80 57 169.84 10.00 1000 7.904 167.29 7.50 985 9.00 58 169.84 8.00 1000 8.505 170.69 6.00 1005 8.75 59 178.33 9.00 1050 12.00

图 4 不同盐浓度菠萝蛋白酶水解唾液生物膜，△F 和△D 随时间的变化曲线(a)C=0.001M;(b)C=0.005M;(c)C=0.01M;(d)C=0.03M;(e)C=0.05M;(f)C=0.07M
【参考文献】

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本文编号：2886610