兔抗破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶多克隆抗体的制备与应用

发布时间：2020-11-16 21:14

　　 在临床正畸矫治过程中,正畸牙牙槽骨在正畸矫治力的作用下发生了适应性改建,从而使正畸牙发生移动,但是在受压力侧牙周组织中会产生白细胞介素,肿瘤坏死因子α等多种因子,在一系列信号因子转导的作用下,受压侧牙根表面发生不同程度的吸收。目前,正畸学界对于牙根吸收的发生与发展机制尚未完全明了,而如何避免和减轻牙根吸收的程度是每一位正畸医生在正畸治疗过程中都应该时刻引起重视的问题。蛋白质酪氨酸磷酸酶(Protein Tyrosine Phosphatases,PTPs)是细胞内的一种调节因子,参与了许多细胞信号转导过程,其对破骨细胞的调节作用在近年来逐渐被人们所发现,在破骨细胞的分化、增殖、活化以及成熟等的过程中均有PTPs的参与。近年来,大量的研究显示破骨细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶(Osteoclastic protein-tyrosine phosphatase,PTP-oc)在破骨细胞的分化、形成以及其活性的调节过程中均有显著的调控作用,也是生物体内骨代谢活动的重要调控因子。因此深入研究PTP-oc的功能,将会为今后在正畸牙根吸收的预防和治疗方面提供实验依据。为此本研究通过免疫家兔首次制备出了PTP-oc的兔抗多克隆抗体,为后续研究PTP-oc的功能和作用机制奠定了实验基础。本研究利用构建的p ET28a-ΔPTP-oc重组质粒转化至E.coliBL21(DE3)中,经鉴定后扩增转化成功的细菌,应用IPTG在16℃、24h条件下诱导重组蛋白表达,表达产物经过Q柱阴离子交换和Ni-NTA镍离子柱亲和层析获得纯化的PTP-oc重组蛋白,并用SDS-PAGE鉴定纯化的PTP-oc重组蛋白。将纯化后的重组蛋白作为抗原和弗氏佐剂混合后免疫家兔。采用间接ELISA法检测第4次免疫后抗血清的效价,结果显示抗血清效价大于1:32 000,用Protein A琼脂糖纯化抗血清获得纯化抗体,采用Western blotting法检测经RANKL诱导第5天的RAW264.7细胞中PTP-oc的表达,检测结果显示所得抗血清可以识别诱导第5天的RAW264.7细胞中的PTP-oc蛋白,抗体有较高的特异性。
【学位单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R783.5
【部分图文】：

SDS-PAGE 检测重组 PTP-oc 的表达和纯化ISA 法测定抗体效价用的是家兔背部皮下多点注射的方法进行匀后，可以在皮下组织中缓慢的释放，可态。依据动物免疫实验抗体产生的基本规体内便会产生相应抗原的抗体，但是若无价和含量将会处于较低水平，因此需在初次加强免疫，在接触相同的抗原后，实验抗体，且效价也会逐渐提高，本实验在第

-PAGE 法检测 PTP-oc 抗血中 PTP-oc 蛋白的表达属于单核巨噬细胞系，是目前国内外公认的破骨细 细胞经过 RANKL 诱导后白，其产生的骨吸收陷窝较研究[43]已成功的培养出了，因此收集经 RANKL 诱经过 SDS-PAGE 电泳后转

A BWestern blotting 法检测 RAW264.7A 为经过 Protein A 亲和层析后获 细胞的蛋白提取物相结合，在 47 k RAW264.7 细胞中天然的 PTP-ocAPDH 的图像。从实验结可以看出
【参考文献】

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本文编号：2886674