RECK基因和MMP-9在口腔鳞癌中的表达及青蒿琥酯抑制Tca8113细胞的实验研究

发布时间：2020-11-23 15:03

　　 目的：研究抑癌基因RECK在口腔鳞癌淋巴道转移中的作用及其临床意义，探讨RECK基因在口腔鳞癌淋巴道转移中的调节机制以及中药青蒿琥酯(Artesunate,ART)抑制口腔鳞癌侵袭转移的机制。方法：1、收集符合实验条件的口腔鳞癌组织60例，采用免疫组化技术分析RECK基因和MMP-9在肿瘤组织中的表达和临床意义，并分析其相互关系；2、体外培养Tca8113细胞,用不同浓度的ART进行干预，采用MTT法观察各浓度组对Tca8113细胞的生长抑制作用，并用流式细胞仪分析各浓度组对Tca8113细胞凋亡的影响，采用免疫组化技术分析各浓度组的ART对Tca8113细胞中RECK基因和MMP-9的蛋白表达水平的影响；3、通过建立口腔鳞癌细胞淋巴道转移的动物模型，并采用转移后实验动物腹部注射ART进行干预，采用免疫组化技术分析移植瘤以及转移淋巴结中RECK基因和MMP-9的表达，拟探讨ART抑制口腔鳞癌细胞转移的作用及其机制。结果：1、检测60例口腔鳞癌临床标本发现抑癌基因RECK的阳性表达率为51.67%，在正常组织中的阳性表达率为90%，二者相比差异有统计学意义（P0.05)；MMP-9的阳性表达率为78.33%，在正常组织中的阳性表达率为20%，二者相比差异有统计学意义（P0.05)。RECK与MMP-9的表达水平与口腔鳞癌病理分级、TMN分期以及淋巴结转移密切相关(P0.05)，随着恶性程度的增加，淋巴结转移程度的递进，RECK蛋白表达水平逐渐下降，并且与MMP-9表达水平呈负相关，相关系数为-3.266(P0.05)；2、MTT检测发现，ART能有效地抑制Tca8113细胞的增殖活性，各浓度组与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)，其作用随着干预时间的延长及药物浓度的增加越来越明显，且在72h效果最明显。流式细胞术检测ART作用72h能有效地诱导Tca8113细胞的早期和晚期凋亡，且早期凋亡率大于晚期凋亡率，除12.5ug/ml外，各浓度组与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)，并随着药物浓度的增加，凋亡率越来越高，呈现剂量依赖性。免疫组化结果显示，ART作用72h后，随着用药浓度的增加，RECK阳性表达细胞的数量呈逐渐增加的趋势，其平均光密度值也逐渐升高，且在浓度为200ug/ml时最高，除12.5ug/ml以外，各浓度组与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)，而MMP-9阳性表达细胞的数量除12.5ug/ml以外，其余随着药物浓度的增加其光密度值逐渐降低，且在200ug/ml最低，与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)；3、经200mg/kg浓度的ART治疗干预动物模型后发现，ART组移植瘤的平均重量明显低于阴性对照组（P0.05），可见ART能明显抑制口腔鳞癌细胞的生长侵袭转移能力，但移植瘤及淋巴结转移中口腔鳞癌细胞的RECK与MMP-9的蛋白表达水平，各组相比差异没有统计学意义（P＞0.05）。结论：1、RECK基因在口腔鳞癌中的蛋白表达水平随着口腔鳞癌患者的临床病理分级、TNM分期、淋巴结转移的递进逐渐下降相关，而MMP-9的蛋白表达水平逐渐升高，二者与患者的年龄、性别、肿瘤的大小等临床特征没有关系。由于临床病理分级、TNM分期、有无淋巴结转移是判断肿瘤患者预后的主要参考指标，因此，检测RECK基因的蛋白表达水平可能对患者的预后有一定的参考价值；2、RECK基因与MMP-9在口腔鳞癌中的表达水平与口腔鳞癌患者的临床病理特征有密切的关系，RECK基因可以通过下调MMP-9蛋白水平的表达来抑制口腔鳞癌的侵袭与转移。3、ART能够抑制口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖，并对其早期和晚期凋亡均有促进作用，并随着药物浓度的增加逐渐上升；4、ART可能通过上调RECK在Tca8113细胞中的表达来下调MMP-9的蛋白表达，从而抑制Tca8113细胞的增殖，促进其凋亡；5、ART对口腔鳞癌的生长浸润及淋巴道转移有抑制作用，这提示ART在口腔鳞癌的治疗方面具有潜在的基础与临床研究价值，为新型抗肿瘤药物及辅助化疗药物的筛选提供了一个方向。
【学位单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2012
【中图分类】：R739.8
【文章目录】：
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Abstract
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本文编号：2894733