与颞下颌关节盘细胞共培养诱导骨髓间充质干细胞向成纤维细胞样细胞分化的研究

发布时间：2021-02-19 23:17

　　目的:探讨直接接触共培养法和Transwell间接接触共培养法诱导山羊骨髓间充质干细胞（Goat bone marrow mesenchymal stem cells,gBMSCs）向山羊颞下颌关节盘细胞（Temporomandibular joint disc cells,TMJ disc cells）中成纤维细胞样细胞分化的可行性及共培养最佳比例,为颞下颌关节盘组织工程的种子细胞来源提供理论依据。方法:1.BMSCs的提取培养和鉴定——提取培养原代BMSCs并传代;流式细胞仪检测BMSCs表面标志物;10μg/L bFGF的成纤维软骨诱导液诱导的BMSCs;甲苯胺蓝染色、天狼猩红染色、番红O染色、Ⅰ型胶原免疫组织化学染色分别检测生长因子诱导后的BMSCs成纤维细胞样分化的潜能。2.TMJ disc cells的原代、传代培养并鉴定其特异性——提取并培养原代山羊颞下颌关节盘细胞;CCK8法检测细胞的增殖活性;甲苯胺蓝和天狼猩红染色鉴定TMJ disc cells;免疫组织化学染色检测Ⅰ、Ⅱ型胶原的分布;Elisa试剂盒检测糖胺聚糖（Glycosaminoglycan,GAG）表达水平... 

【文章来源】：兰州大学甘肃省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
前言
第一章 骨髓间充质干细胞的培养、鉴定和诱导
    1.1 引言
    1.2 实验方法
        1.2.1 山羊BMSCs的分离培养
        1.2.2 BMSCs表面标记检测
        1.2.3 BMSCs成纤维软骨诱导
        1.2.4 BMSCs的冻存与复苏
            1.2.4.1 BMSCs冻存
            1.2.4.2 BMSCs复苏
    1.3 实验结果
        1.3.1 原代BMSCs的形态学观察
        1.3.2 BMSCs诱导后倒置显微镜观察
        1.3.3 BMSCs表面标志物检测
        1.3.4 BMSCs诱导后组织学染色结果
    1.4 讨论
    1.5 小结
第二章 颞下颌关节盘细胞的培养
    2.1 引言
    2.2 实验方法
        2.2.1 山羊TMJ disc cells的分离培养
        2.2.2 山羊TMJ disc cells的复苏与冻存
        2.2.3 山羊 TMJ disc cells 的形态学染色
        2.2.4 CCK8 法检测山羊 TMJ disc cells 的增殖活性
        2.2.5 统计学分析统计学处理
    2.3 实验结果
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 直接和间接Transwell共培养体系下诱导骨髓间充质干细胞向成纤维细胞样细胞分化的研究
    3.1 引言
    3.2 实验方法
        3.2.1 BMSCs和颞下颌关节盘细胞直接共培养法
        3.2.2 BMSCs和颞下颌关节盘细胞Transwell共培养法
        3.2.3 细胞增值能力分析
        3.2.4 测定指标
        3.2.5 GAG的定量检测
        3.2.6 实时荧光定量PCRⅠ型、Ⅱ型胶原基因表达分析
        3.2.7 WB检测Ⅰ、Ⅱ型胶原
        3.2.8 统计学处理
    3.3 实验结果
        3.3.1 CCK8 法检测共培养细胞的增殖活性
        3.3.2 Ⅰ型胶原的定性检测
        3.3.3 GAG定性检测
        3.3.4 Ⅱ型胶原定性检测
        3.3.5 GAG定量检测
        3.3.6 Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原基因表达的定量分析
        3.3.7 Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原蛋白表达量检测
    3.4 讨论
    3.5 小结
全文总结
    1 本文的主要小结
    2 本文的创新之处
    3 尚需完善及进一步研究之处
参考文献
缩略词表
在学期间成果
致谢
临床病例左上后牙牛牙症RCT一例


【参考文献】：
期刊论文
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[3]山羊骨髓间充质干细胞向纤维软骨分化的形态学改变[J]. 苏雪莲,包广洁,康宏,刘琳,孔楠楠.  中国组织工程研究. 2014(06)
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硕士论文
[1]静电纺纤维负载共培养细胞膜片构建组织工程关节盘的实验研究[D]. 王春晖.吉林大学 2016
[2]干细胞源性纤维软骨自组装基体的构建及力学性能研究[D]. 吕玮.兰州大学 2016
[3]骨髓间充质干细胞体外诱导山羊TMJ关节盘细胞的实验研究[D]. 苏雪莲.兰州大学 2010



本文编号：3041841