三维培养条件下大鼠成釉器细胞生物学特性的研究

发布时间：2021-02-26 03:21

　　牙成釉细胞不仅可以分泌釉基质形成牙釉质,而且参与调控成牙本质细胞的分化和分泌基质,在牙齿发育中发挥着重要的作用。环境因素、营养障碍、外伤、炎症以及遗传缺陷等可造成牙成釉细胞的分化异常,其表现形式多种多样,如氟牙症、四环素牙、釉质发育不全、牙本质形成不全等。进行成釉细胞的细胞生物学相关研究对于揭示成釉细胞的分化、牙釉质的形成和对成牙本质细胞调控的分子机制具有重要意义,对牙齿组织工程研究具有重要的理论指导意义。成釉细胞为终末分化细胞,在牙冠发育形成后逐渐退化为缩余釉上皮,牙齿萌出后自然脱落,因而成釉细胞的获得和体外培养难度较大。迄今为止,牙成釉细胞的细胞生物学及分子调控机制的研究成果皆建立在大家所熟悉的方便、廉价的二维细胞培养基础上。虽然体外分离培养成釉细胞的方法较多,但均存在一定的缺陷。另外,二维培养条件下细胞的基因表达和生物学特性发生了变化,导致细胞去分化、部分蛋白的表达丧失、蛋白合成能力下降。如何获得更接近于体内细胞生长微环境、保持细胞生物学特性的体外细胞培养方法是急需解决的问题。三维立体培养系统不仅可提供接近于体内的培养微环境,还可以高通量地研究特定基因改变与细胞表型的关系及其生物... 

【文章来源】：中国人民解放军空军军医大学陕西省 211工程院校

【文章页数】：118 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

大鼠第一磨牙牙胚HE染色a.出生后1天大鼠第一磨牙牙胚b.出生后2天大鼠第一磨牙牙胚c.出生后3天

第四军医大学博士学位论文本实验成功分离获得了第一磨牙牙胚（图2a），并进一步将其分离为釉器和牙乳头两部分(图2b)。经胰蛋白酶消化法，将成釉器消化为单，一般可收获1x105个细胞/个牙胚。差速贴壁1小时，可去除大部分细胞。经体外培养7日后，相差显微镜观察可见，细胞为多角形，呈石状生长。细胞核明显，细胞间为紧密连接，成片生长，（图2c、2d生后第5、6天的大鼠成釉器细胞，经体外培养6天后，细胞出现死亡见大量漂浮的死细胞且细胞数量少。相比之下，第3、4天的大鼠成釉胞则表现得非常健康，第4天成釉器增殖能力较强，细胞扩增倍数高三天组。而第1、2天大鼠成釉器细胞较少，收获细胞数量少，约为0.5x/mL，上皮细胞呈铺路石样生长特性不典型，混杂大量多角形、散在分胞。

图4牙成釉器细胞的传代培养（Bar=100μm）a. P1代牙成釉细胞细胞b. P2代牙成釉细胞细胞3.5 细胞免疫组织化免疫组化结果显示，所培养细胞为上皮细胞标志性蛋白CK14阳性（图5.a），间充质来源细胞标志性蛋白vimentin染色阴性(图5.b)。空白对照组显示CK14免疫组化染色阴性(图5.c)。

【参考文献】：
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本文编号：3051986