1.脱细胞基质对牙周韧带干细胞体外增殖分化的影响 2.根向复位瓣联合异种胶原基质增加种植体周围角化黏膜宽度的临床研究

发布时间：2021-03-02 17:42

　　目的:制备人牙周韧带细胞（periodontal ligament cells,PDLCs）、牙髓细胞（dental pulp cells,DPCs）、牙龈成纤维细胞（gingival fibroblasts,GFs）来源的脱细胞基质（decellularized matrix,DCM）,检测其对人牙周韧带干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）增殖、分化的影响。方法:采用表面活性剂联合DNA酶制备PDLCs、DPCs和GFs来源的脱细胞基质。将同种异体的PDLSCs接种于脱细胞基质,Pico Green试剂盒检测其对PDLSCs增殖能力的影响,定量实时荧光聚合酶链应（quantitative real time polymerase chain reaction,q RT-PCR）检测PDLSCs成骨、成牙骨质和成牙周韧带相关基因的表达,包括碱性磷酸酶（ALP）、Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）、牙骨质蛋白1（CEMP1）、骨膜素（POSTN）和I型胶原α1（COL1A1）。结果:通过表面活性剂联合DNA酶获得的PD... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：109 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

倒置光学显微镜观察PDLCs、DPCs和GFs的原代培养情况：（A）少量PDLCs从组织块边缘爬出；（B）大量DPCs生长并以组织块为中心呈放射状排列；（C）组织块周围见GFs爬出，呈涡旋状生长

浙江大学硕士学位论文第一部分结果21图2倒置相差显微镜观察第4代PDLCs、DPCs和GFs的形态：（A）PDLCs形态为长梭形或星形，有2～3个胞质突起，胞核圆形或椭圆形，核仁清晰；（B）DPCs呈梭形或多角形，胞质突起较PDLCs和GFs短；（C）GFs为长梭形，胞质突起较细长。2.2PDLSCs的克隆分离鉴定2.2.1形态学观察采用有限稀法成功获取PDLSCs，采用倒置光学显微镜和倒置相差显微镜观察第2代PDLSCs，细胞呈长梭形，胞核呈圆形或卵圆形、位于胞体中央，核仁清晰（图3A、B）。图3第2代PDLSCs的形态学观察：倒置光学显微镜（A）和倒置相差显微镜（B）见细胞呈长梭形，胞核呈圆形或卵圆形、位于胞体中央，核仁清晰。2.2.2CCK-8法增殖实验结果采用CCK-8试剂盒检测第3代PDLSCs的增殖情况，并绘制细胞增殖曲线（图4）。PDLSCs增殖活力较强，接种后第3天即进入细胞增殖旺盛期，从第10天开始增殖速度减缓，之后进入平台期。

浙江大学硕士学位论文第一部分结果22图4第3代PDLSCs的细胞增殖曲线（横轴为细胞培养天数，纵轴为OD值）：PDLSCs接种后第3天即进入细胞增殖旺盛期，从第10天开始增殖速度减缓，之后进入平台期。2.2.3流式细胞术结果流式细胞仪检测第3代PDLSCs表面分子的表达情况，结果显示，PDLSCs表面阳性表达CD105、CD146，其表达率分别为85.02％、96.88%（图5A、B），而几乎不表达CD45（0.05%）（图5C）。图5第3代PDLSCs表面分子的表达情况：PDLSCs表面阳性表达CD105（85.02％）和CD146（96.88%），但几乎不表达CD45（0.05%）。2.2.4克隆形成实验结果将第3代PDLSCs以低密度接种后细胞呈集落样生长，培养14天后用0.1%结晶紫溶液染色，染色结果显示，PDLSCs的克隆形成率为68.67%（图6）。

【参考文献】：
期刊论文
[1]新型胶原基质与游离龈移植术增宽种植区域角化组织效果的短期临床观察[J]. 王琪,孟焕新,宋文莉,李文静,石姝雯,侯建霞,韩劼.  中华口腔医学杂志. 2019 (02)



本文编号：3059668